基于磁性分离和多色量子点标记的抗人肺炎链球菌IgM、IgG抗体快速共检的方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于磁性分离和多色量子点标记的抗人肺炎链球菌IgM、IgG抗体快速共检的方法和试剂盒，其中，该试剂盒由具有富集抗人肺炎链球菌IgM、IgG抗体功能的抗人肺炎链球菌抗体捕获纳米磁珠、多色量子点分别标记的抗人IgM、IgG抗体纳米探针、质控品以及PBST缓冲液所组成；质控品包括阳性质控品以及阴性质控品；阳性质控品为人肺炎链球菌感染者的抗人肺炎链球菌IgM、IgG抗体分别为阳性的血清；阴性质控品是抗人肺炎链球菌IgM、IgG均为阴性的人血清。本发明具有简便、快速以及高灵敏度的优点，可实现对抗人肺炎链球菌IgM、IgG抗体的同步检测。

主权项

一种基于磁性分离和多色量子点标记的抗人肺炎链球菌IgM、IgG抗体快速共检的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)重组人肺炎链球菌PspA蛋白的制备；2)将步骤1)制备得到的重组人肺炎链球菌PspA蛋白与纳米磁珠通过共价偶联，制得抗人肺炎链球菌抗体捕获纳米磁珠；3)将鼠抗人IgM单克隆抗体与发射波长为520nm的纳米量子点通过共价偶联，制备量子点标记的抗人IgM纳米探针；将鼠抗人IgG单克隆抗体与发射波长为600nm的纳米量子点通过共价偶联，制备量子点标记的抗人IgG纳米探针；将量子点标记的抗人IgM纳米探针与量子点标记的抗人IgG纳米探针等量混合即制得多色量子点分别标记的抗人IgM、IgG纳米探针；4)取人血清样本，用PBSA缓冲液适当稀释后，分别向血清稀释液中加入步骤2)制备得到的抗人肺炎链球菌抗体捕获纳米磁珠以及步骤3)制备得到的多色量子点分别标记的抗人IgM、IgG纳米探针，充分混合，反应10‑45min后进行磁分离，以PBST缓冲液洗涤2遍后，使用荧光酶标仪，在发射波长分别为520nm及600nm下分别读取荧光值；所述PBSA缓冲液中各组分含量分别为：8g/L NaCL，0.2g/L KCl，0.24g/L KH₂PO₄，1.44g/L Na₂HPO₄，5g/L BSA；所述PBSA缓冲液的pH＝7.4；所述PBST缓冲液中各组分含量分别为：8g/L NaCL，0.2g/L KCl，0.24g/L KH₂PO₄，1.44g/L Na₂HPO₄，5g/L BSA，0.3g/L NaN₃，0.5ml/L Tween‑20；所述PBST缓冲液的pH＝7.4；5)根据步骤4)的方法检测至少30份经临床各种方法均确定为抗人肺炎链球菌IgM、IgG抗体均为阴性的人血清，分别读取发射波长分别为520nm及600nm下的荧光值；所述抗人肺炎链球菌IgM、IgG抗体均为阴性的人血清简称人肺炎链球菌抗体阴性对照样品；所述人肺炎链球菌抗体阴性对照样品在发射波长为520nm的荧光值的平均值与3倍标准差之和记为CUT‑OFF1值；所述人肺炎链球菌抗体阴性对照样品在发射波长为600nm的荧光值的平均值与3倍标准差之和记为CUT‑OFF2值；若步骤4)中人血清样本在发射波长为520nm的检测荧光值大于CUT‑OFF1值，则判断为人血清样本中抗人肺炎链球菌IgM抗体为阳性；若步骤4)中人血清样本在发射波长为520nm的检测荧光值小于CUT‑OFF1值，则判断为人血清样本中抗人肺炎链球菌IgM抗体为阴性；若步骤4)中人血清样本在发射波长为600nm的检测荧光值大于CUT‑OFF2值，则判断为人血清样本中抗人肺炎链球菌IgG抗体为阳性；若步骤4)中人血清样本在发射波长为600nm的检测荧光值小于CUT‑OFF2值，则判断为人血清样本中抗人肺炎链球菌IgG抗体为阴性。