主权项 |
一种改进的测定氨基酸含量的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)准确称取试样0.1000g于10ml安瓿瓶中,然后向瓿瓶中准确加1+1的盐酸5ml,将安瓿瓶封口,冷却后,用胶布包好安瓿瓶,防止在恒温消化时安瓿瓶破裂,置于恒温干燥箱中消化;(2)消化完成后取出安瓿瓶冷却至室温,切开安瓿瓶,过滤消化液,立即准确移取1mL滤液于50mL容量瓶中,此时容量瓶内很多泡沫,加2‑3滴乙醇消泡,然后加水稀释至刻度;(3)稀释液通过0.45μm孔径的滤膜过滤,得到的滤液待用;滤液可在4℃条件下存放4小时;(4)标样的稀释处理用pH2.20的0.07mol/L柠檬酸钠稀释2.5μmol/mL的标样25倍,得浓度为0.1μmol/mL的标样待用,所述稀释标样可在4℃条件下保存1个月;(5)配制流动相流动相A液:称取58.8g柠檬酸钠,溶解于2.5L水中,加乙醇210mL,加高氯酸50mL,加水稀释至3L,将该稀释液用60%高氯酸或4mol/L氢氧化钠,准确调节pH值至3.20,并通过0.45mm孔径的滤膜过滤;流动相B液:称取柠檬酸钠58.8g和硼酸12.4g溶解于800mL水中,加4mol/L氢氧化钠溶液30mL,加水稀释至1L,将该稀释液用60%高氯酸或4mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值为10.00并通过0.45μm孔径的滤膜过滤;流动相C液:称取氢氧化钠4g,加水稀释至500mL,并通过0.45μm孔径的滤膜过滤;以上三种流动相不用时均应在4℃环境中存放;(6)反应液的配制硼酸‑碳酸钠缓冲溶液:称取122.1g无水碳酸钠、56.4g硫酸钾和40.7g硼酸加水至3L;A反应液:用量筒量取500mL硼酸‑碳酸钠缓冲溶液倒入试剂瓶中,加0.2mL氯酸钠溶液,混合均匀;B反应液:称取邻苯二甲醛400mg,加乙醇7mL、2‑巯基乙醇1mL、10%的十二烷基聚乙二醇醚2mL,用硼酸‑碳酸钠缓冲溶液定容至500ml;以上A、B反应液可在4℃条件下保存7天;(7)上机分析用微量注射器注入10μL试样及标样于高效液相色谱仪上进入分析,得色谱图;根据出峰时间鉴定样品中氨基酸的种类,将样品峰面积与标样对比,计算样品中各种氨基酸含量。 |