松材线虫的玻璃化冷冻保存及解冻复苏方法

摘要

本发明公开了松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的玻璃化冷冻保存及解冻复苏方法，该方法包括以下步骤：(1)将松材线虫悬液与冷冻保护剂混合均匀得到混合物；将混合物进行平衡处理；(2)平衡处理后的混合物在液氮中冷冻保存；(3)解冻、复苏；其中，所述的冷冻保护剂是二甲基亚砜和卵黄。本发明对玻璃化冷冻保存方法中的各工艺参数进行了优化，筛选到了最适宜于松材线虫玻璃化冷冻保存的保护剂的种类、浓度以及包括预处理、平衡和解冻复苏在内的最适宜的处理方式。采用本发明方法冷冻保存松材线虫，冷冻后的松材线虫存活率高、冻后繁殖率高，能适用于松材线虫不同株系的冷冻保存。

主权项

松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的玻璃化冷冻保存及解冻复苏方法，包括以下步骤：(1)将松材线虫悬液进行预处理；所述的预处理是将松材线虫悬液与二甲基亚砜和甘油混合在一起得到混合物1，将混合物1在室温下静置处理；按v/v计，二甲基亚砜在混合物1中的终浓度是3％；甘油在混合物1中的终浓度是5％；(2)向预处理后的混合溶液1中加入卵黄和清蛋白并补加二甲基亚砜得到混合物2；按v/v计，二甲基亚砜在混合物2中的终浓度是4％；按g/ml计，卵黄在混合物2中的终浓度是20％，清蛋白在混合溶液2中的终浓度为0.1％；将混合物2进行平衡处理；(2)平衡处理后的混合物2在液氮中冷冻保存；(3)解冻、复苏。