同源四倍体七叶一枝花植株的培育方法

摘要

本发明公开了一种同源四倍体七叶一枝花植株的培育方法，可以克服七叶一枝花在自然繁殖和人工种植中出现的品种退化问题，步骤如下：(1)繁育组培苗；(2)秋水仙素处理：用以下两种方法之一处理：①在无菌条件下，选取组培继代苗，在茎部造成若干创伤，然后用脱脂棉包裹严密，再在脱脂棉上滴入秋水仙素溶液浸润，在分化培养基上培养，用无菌水洗净，切成单芽后转接到丛生芽诱导培养基中；②将组培苗转接至添加秋水仙素的分化培养基中，培养后，切成单芽转接至丛生芽诱导培养基中；(3)植株分化培养；(4)植株增殖培养；(5)植株染色体检测；(6)选育同源四倍体植株。本发明的方法，对于扩大特有珍稀药用植物种植面积有重要意义。

主权项

一种同源四倍体七叶一枝花植株的培育方法，其特征在于：步骤如下：(1)繁育组培苗：取七叶一枝花植株的叶芽，通过植物组织培养技术，繁育出组培苗；(2)秋水仙素处理：用以下两种方法之一处理：①在无菌条件下，选取组培继代苗，在茎部造成若干创伤，然后用脱脂棉包裹严密，再在脱脂棉上滴入质量浓度为0.03％～0.05％的秋水仙素溶液浸润，在分化培养基上培养10～15天后，用无菌水洗净，切成单芽后转接到丛生芽诱导培养基中；②将组培苗转接至添加质量浓度为0.05％～1.0％的秋水仙素的分化培养基中，培养20～30天后，切成单芽转接至丛生芽诱导培养基中；所述分化培养基的组份组成为：MS+BA 0.5～0.8mg/L+GA₃ 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+CTK 0.3～0.5mg/L；所述在分化培养基中培养的培养条件为：温度25～30℃，每天日照8～12h，光照强度60μmol·m^‑2·s^‑1；所述丛生芽诱导培养基的组分组成为：MS+BA 1.5～2.0mg/L+GA₃ 0.1～0.5mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖20～30g/L；(3)诱导植株分化培养：在丛生芽诱导培养基中培养25～35天，诱导产生丛生芽，培养条件为：温度20～30℃，每天日照8～12h，光照强度120μmol·m^‑2·s^‑1；(4)诱导植株增殖培养：将上述长出的丛生芽转接入增殖培养基中，在温度20～30℃，每天日照8～12h，光照强度120μmol·m^‑2·s^‑1的条件下，培养25～35天，将丛生芽分株培养成完整植株；所述增殖培养基的组分组成为：MS+BA 2.0～3.0mg/L+NAA 0.2～0.5mg/L+蔗糖20～30g/L；(5)诱导植株染色体检测：切取步骤(4)中得到的完整植株，在解剖镜下剥离茎尖，经过压片染色，在显微镜下进行染色体数目检测；(6)选育同源四倍体植株：通过染色体数目检测，筛选出四倍体植株，转接至生根培养基中，在温度25～30℃，每天日照8～12h，光照强度120μmol·m^‑2·s^‑1的条件下，培养25～35天，即培育出同源四倍体完整植株；所述生根培养基的组份组成为：1/2MS+NAA 0.1～0.3mg/L+蔗糖20～30g/L。