苹果潜隐病毒和类病毒的多重RT-PCR检测方法

摘要

本发明提供一种可同时检测苹果树叶片、枝条、花和果实是否携带3种潜隐病毒(苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎沟病毒和苹果茎痘病毒)和苹果锈果类病毒属3种类病毒(苹果锈果类病毒、苹果凹果类病毒、苹果皱果类病毒)的多重RT-PCR检测方法。利用该方法进行检测，具有检测结果易于判别、操作简便、反应快速、灵敏度高等优势，克服了现有技术中耗时、步骤繁琐、条带不易区分、灵敏度低等缺点，为苹果病毒病的检测提供了一种便于推广应用的快速检测方法。

主权项

苹果潜隐病毒和类病毒的多重RT‑PCR检测引物组合，其特征在于，所述引物组合包括：用于特异性RT‑PCR检测苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus)的引物对I：ACLSV‑F 5′‑GAGANTTTCAGTTTGCTMGA‑3′ACLSV‑R 5′‑AGTCTACAGGCTATTTATTATAAGT‑3′其中，N为A或G，M为A或C；用于特异性RT‑PCR检测苹果茎沟病毒(Apple stem grooving vir us)的引物对II：ASGV‑F 5′‑TGGAAACCGAGGATGGACAG‑3′ASGV‑R 5′‑CTGGTACCCAAACCCAAGCCTTAG‑3′；用于特异性RT‑PCR检测苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus)的引物对III：ASPV‑F 5′‑GAAGTAATCGCATCATTCAC‑3′ASPV‑R 5′‑GATATGTACCTATTGATGGTTTC‑3′；以及用于特异性RT‑PCR检测苹果锈果类病毒属(Apscarviroid)3种类病毒：苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid)、苹果凹果类病毒(A pple dimple fruit viroid)和苹果皱果类病毒(AFCVd)的通用引物对IV：apscarviroids‑F 5′‑AGACCCTTCGTCGACGACGA‑3′apscarviroids‑R 5′‑TGTCCCGCTAGTCGAGCGGA‑3′。