基于邻位触击效应的均相化学发光免疫分析方法

摘要

本发明涉及一种基于邻位触击效应的均相化学发光免疫分析方法。该方法的检测溶液包括DNA1-抗体1偶联物、DNA2-抗体2偶联物、辅助DNA3、辅助DNA4、分子信标DNA5和限制性内切酶。目标蛋白质存在时，DNA1-抗体1与DNA2-抗体2形成夹心免疫复合物，使得分别与DNA1、DNA2杂交的DNA3、DNA4相互靠近，形成邻位触击复合物，与DNA5杂交打开其发卡结构，染料Cy5远离猝灭剂产生化学发光。复合物与DNA5形成的双链还能被内切酶识别，将DNA5剪切后打开新的DNA5，如此循环可在位放大发光，实现对目标蛋白质的高灵敏定量分析。该发明实现了蛋白质快速、一步化检测，操作简单、普适性高。

主权项

本发明涉及一种基于邻位触击效应的均相化学发光免疫分析方法。其特征在于该方法的检测溶液包含DNA1‑抗体1偶联物、DNA2‑抗体2偶联物、辅助DNA3、辅助DNA4、分子信标DNA5和限制性内切酶。在目标蛋白质存在时，DNA1‑抗体1偶联物与DNA2‑抗体2偶联物通过夹心免疫反应形成免疫复合物，同时DNA1与辅助DNA3、DNA2与辅助DNA4互补杂交，使辅助DNA3与辅助DNA4相互靠近，产生邻位触击效应，形成邻位触击复合物，该复合物具有与分子信标DNA5互补的序列，因而与分子信标DNA5杂交，打开其发卡结构。邻位触击复合物与DNA5形成的双链结构能被限制性内切酶识别，将DNA5剪切成超短链DNA，并从复合物上脱落，产生游离的化学发光染料(Cy5)，而该复合物可与另一DNA5进行杂交，打开其发卡结构，并通过限制性内切酶进行第二轮剪切，如此循环，可产生大量游离Cy5。在检测溶液中加入化学发光底物，可获得灵敏的Cy5化学发光信号，实现对目标蛋白质的高灵敏定量分析。