院内感染多病原体并行检测基因芯片及其制作方法和应用

摘要

本发明属于分子生物学技术及临床检测技术领域，特别公开了一种院内感染多病原体并行检测基因芯片及其制作方法和应用。本发明可以一次反应同时对鲍氏不动杆菌、阴沟肠杆菌、粪肠球菌等14种医疗感染典型病原体进行快速、灵敏的检测，提供传统扩增方法无法提供的酵母和细菌共感染的检测数据，另外还包括一个甲氧西林抗性靶点，从而可以进一步实现对葡萄球菌感染的检测，这样可以让临床医生在一两个小时内就能知道病人是何种病原体感染，有没有耐药性，从而决定病人是否该用或者用哪种抗菌素，对临床的指导意义就更大。

主权项

一种院内感染多病原体并行检测基因芯片，主要由固定有相关病原体特异性探针的基因芯片、特异性引物及通用引物组成，其特征在于：所述相关病原体包括鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、肺炎杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、白色念珠菌、克鲁斯念珠菌、光滑假丝酵母、近平滑念珠菌和热带念珠菌共14种病原体，另外还包括一个甲氧西林抗性靶点；所述基因芯片是点阵并固定有上述15种病原体特异性探针，所述特异性引物能对上述15种病原体靶基因进行特异性扩增；所述通用引物是上述15种病原体靶基因无关的核酸序列，其中反向通用引物5’端带有荧光标记；所述基因芯片中的15种探针为：鲍氏不动杆菌：5’—AAG TGT AGC TCA TCT TGA AG—3’； 金黄色葡萄球菌：5’—ACT TAA TGA CTC TCA AGC T—3’； 绿脓假单胞菌：5’—ACT CCA CCG A CT CGA TCG TC—3’；肺炎杆菌：5’—ACG TGC TGC CCG CCT ATG AA—3’； 粪肠球菌：5’—TTA ATA TTT TAA ACA AAG AT—3’； 屎肠球菌：5’—ATG ATA TTG AGT TAG ATG AA—3’； 大肠杆菌：5’—AGG TTA AAG CGA CTG AGG TC—3’； 阴沟肠杆菌：5’—GGA TAT CAA A CC GTT CTT TA——3’； 奇异变形杆菌：5’—ATT ATG ATG AGC CAA AAA AT—3’； 白色念珠菌：5’—GAA CAA AAA A AA TTT GCT AA—3’； 克鲁斯念珠菌：5’—AAG AAG ATT GGT TTT CTT GA—3’； 光滑假丝酵母：5’—AAG AAA TCT TGT GTT GAC TG—3’； 近平滑念珠菌：5’—GTG CCA TTG ACA ATG TAT GT—3’； 热带念珠菌：5’—CCA TAA TCA ACA GTA TCT TC—3’； 甲氧西林抗性：5’—ATT AAC AGC A AT GAT TGG GT——3’；所述特异性引物的序列如下：鲍氏不动杆菌：5’—GCG AGC TTC CAG AAC AAA GA，5’—GAT GCG CTT GCA TAT GTG GT；金黄色葡萄球菌：5’—CAC GAT GAA GCT CAA CAA AAT GC，5’—TGT TGC GCA TCA GCT TTT GGA；绿脓假单胞菌：5’—GAG TGG CAA CGT ACA CCT CA，5’—CCG GCA CGT ATA CCA CAA GA；肺炎杆菌：5’—GCT GTT TAA CAA CCA GGC CG，5’—CGG GGT ATA GTT GCG CTC TT；粪肠球菌：5’—ATG GGG CCA GAA AAG CTC G，5’—GCC GCA TCA TTG TGT TCC C；屎肠球菌：5’—TGA CTC GGG GAT TGA TAG GC，5’—ACT CTT GGA GCA ATC GTG TCT G；大肠杆菌：5’—AAG CGA CTG TTA GTG CGA CA，5’—CAT CAC CAC CGC TTG CTT TC；阴沟肠杆菌：5’—TGC TGA TCA CCG GGG TTT AC，5’—CAG CAG GTC GTC CGT CAT AA；奇异变形杆菌：5’—GCG GTT TAT CAC GAA GGG GT，5’—ATT GGC AAA ACG AAA CGC CC；白色念珠菌：5’—CCA GTT TTC GGT ACA GGG GT，5’—ACA TTG GCA ACC CCA TGA GT；克鲁斯念珠菌：5’—TGT CTT TGC CTA TGC CGG TT，5’—CAG ACC ACC CAA AGG CAT GA；光滑假丝酵母：5’—GCA TTT CGC TGC GTT CTT CA，5’—GTT GGG GGA ACG CTC TCT TT；近平滑念珠菌：5’—GTG TCG GAC CCA ATG GAT GT，5’—ATA CCC ACC ATC GTA CCC CA；热带念珠菌：5’—CCA CCG AAT GGC AAG TAT GGA，5’—ACC AAG GCT AGT GCT GTT TC；甲氧西林抗性：5’—ACC TCT GCT CAA CAA GTT CCA，5’—ACG TTG TAA CCA CCC CAA GA；以上所有特异性引物5’端都带有一个通用引物标签，通用引物序列如下：5’—ACG TGT TAC TCG CAT AGT CG，5’—TCC TGT ACT CTC TTA CTG AG。