马尾松组培苗瓶外生根方法

摘要

本发明马尾松组培苗瓶外生根方法，取带0.5cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体在培养基Ⅰ中诱导丛芽；将诱导丛芽在培养基Ⅱ中伸长培养，单个切下顶芽接种到培养基Ⅲ中增殖获得继代芽Ⅰ；将继代芽Ⅰ重复伸长，单个切下继代芽Ⅰ并分成顶芽和芽段后在继代增殖培养基Ⅲ中继续增殖获得继代芽Ⅱ，将继代芽Ⅱ再重复伸长与增殖获得新的增殖继代芽；将单个切下高2.5-3.5cm的继代芽移植育苗杯中瓶外生根，然后移栽苗圃培育获得组培瓶外生根苗。本方法简化试管苗生产程序，降低生产成本，提高生产效率，生根处理25-30d，瓶外生根率达92-98%，且根系质量较高，移栽成活率达90-95%，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

主权项

一种马尾松组培苗瓶外生根方法，其特征在于：包括无菌培养体系建立、继代增殖扩繁、组培苗瓶外生根、移栽苗圃培育，获得马尾松组培瓶外生根苗，其操作步骤如下：（1）无菌培养体系建立：将马尾松种子消毒后，在无菌条件下进行种子萌发，然后截取带0.5 cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体，在培养基Ⅰ中进行丛芽诱导获得马尾松丛生芽培养体系；（2）继代增殖扩繁：将诱导出的丛生芽在培养基Ⅱ中进行伸长培养后，单个切下伸长芽的顶芽接种到培养基Ⅲ中进行增殖，获得继代芽Ⅰ；将继代芽Ⅰ重复进行伸长培养，单个切下伸长的继代芽Ⅰ并分成顶芽和芽段后在继代增殖培养基Ⅲ中继续增殖获得继代芽Ⅱ，将继代芽Ⅱ再重复伸长与增殖过程，获得新的增殖继代芽；重复循环继代芽伸长与增殖的步骤，直至获得大量足够生根培养的继代芽；（3）组培苗瓶外生根：将单个切下生长健壮、高2.5‑3.5 cm的继代芽，用含有0.2‑0.6 mg/L ABT₆的GD，或者是含有50‑100 mg/L的吲哚丁酸IBA、25‑50 mg/L的α‑萘乙酸NAA的DCR或SH液体培养基的促根剂，进行30‑60 min浸泡处理或加入滑石粉成糊状进行蘸根处理后，移植于装有瓶外生根基质的育苗杯中，种植后尽快用0.1%多菌灵溶液淋定根水，并覆盖薄膜保湿；组培苗瓶外生根种植后10 d内，控制湿度90‑100%；移植10‑15 d，揭开塑料薄膜两端，控制湿度70‑80%；移植后15‑20 d，揭开塑料薄膜，控制湿度55‑65 %；移植后20‑25 d，当苗木出现新的长势时，隔天以0.1 %的KH₂PO₄加入0.05 %尿素浇施马尾松苗，3‑5次隔天浇施以后，逐步将KH₂PO₄的浓度增加到0.5 %；（4）移栽苗圃：待苗木长势稳定时，移栽到苗圃，并按常规方法进行水肥及病虫害等育苗管理；所述的瓶外生根基质其原料组分和体积配比为：泥炭土∶蛭石∶珍珠岩 = 1∶1∶1；所述的培养基Ⅰ其原料组分和质含量为：6‑BA 2.5‑4.0 mg·L^‑1、NAA 0.05‑0.1 mg·L^‑1、蔗糖30000 mg·L^‑1、酸水解酪蛋白500 mg·L^‑1和改良MS培养基；所述的培养基Ⅱ其原料组分和质含量为：NAA 0.25‑0.4 mg·L^‑1或活性炭3000‑5000 mg·L^‑1、蔗糖30000 mg·L^‑1和改良MS培养基；所述的培养基Ⅲ其原料组分和质含量为：6‑BA 1.0‑3.0 mg·L^‑1、KT 0.5‑1.0 mg·L^‑1、NAA 0‑0.3 mg·L^‑1、蔗糖30000 mg·L^‑1和改良MS培养基；所述的改良MS培养基的基本组分和质含量为：KNO₃ 1650 mg·L^‑1；NH₄NO₃ 600 mg·L^‑1；CaCl₂·2H₂O 260 mg·L^‑1；MgSO₄·7H₂O 370 mg·L^‑1；Ca(NO₃)₂·4H₂O 400 mg·L^‑1；KH₂PO₄ 170 mg·L^‑1；MnSO₄·H₂O 22.3 mg·L^‑1；ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg·L^‑1；CuSO₄·5H₂O 0.025 mg·L^‑1；H₃BO₃  6.2 mg·L^‑1；Na₂MoO₄·2H₂O 0.025 mg·L^‑1；KI 0.83 mg·L^‑1；CoCl₂·6H₂O 0.025 mg·L^‑1；维生素B₁ 1.0 mg·L^‑1；维生素B₆ 0.5 mg·L^‑1；烟酸 0.5 mg·L^‑1；甘氨酸 2.0 mg·L^‑1；肌醇 200 mg·L^‑1。