一种牦牛乳乳脂肪球膜蛋白的分离方法

摘要

一种牦牛乳乳脂肪球膜蛋白的分离方法，它涉及一种蛋白的分离方法。本发明是要解决现有方法制备的牛乳乳脂肪球膜蛋白的纯度低以及性质不稳定的问题。分离方法：在牦牛牛乳中加入蔗糖，通过离心获得乳脂肪初提物，然后用钠离子磷酸盐缓冲溶液和超纯水进行离心洗涤，最后用聚乙二醇辛基苯基醚溶液离心，得到牦牛乳乳脂肪球膜蛋白。本发明制备的牦牛乳乳脂肪球膜蛋白的性质稳定，纯度可达93.5％，解决了现有分离方法制备的牛乳乳脂肪球膜蛋白的纯度低和性质不稳定的问题。本发明适用于牦牛乳乳脂肪球膜蛋白的大量生产。

主权项

一种牦牛乳乳脂肪球膜蛋白的分离方法，其特征在于牦牛乳乳脂肪球膜蛋白的分离方法按以下步骤进行：一、挑选健康牦牛的新鲜牦牛乳，按质量份数称取20份的牦牛乳和1份的蔗糖；二、将步骤一称取的牦牛乳用4层纱布进行过滤后，加入步骤一称取的蔗糖，用磁力搅拌器混合均匀，得到牛乳蔗糖混合液；三、将步骤二得到的牛乳蔗糖混合液在室温条件下进行离心，将离心产物置于4℃条件下，并在该条件下静置10min，得到处于离心产物上层的乳脂肪初提物；其中，离心转速为3800r/min，离心时间为30min；四、在步骤三得到的乳脂肪初提物中，加入2倍于该乳脂肪初提物体积的钠离子磷酸盐缓冲溶液，用磁力搅拌器混合均匀后，在室温条件下进行离心洗涤，将离心产物置于4℃条件下，并在该条件下静置10min；其中，离心转速为4800r/min，离心时间为20min；所述的钠离子磷酸盐缓冲溶液的配制方法为：按每1L钠离子磷酸盐缓冲溶液中含有Na₂HPO₄：4.3mmol、KCl：2.7mmol、KH₂PO₄：1.8mmol和NaCl：137mmol的比例，将Na₂HPO₄、KCl、KH₂PO₄和NaCl加入到去离子水中，并调节其pH至7.4，得到钠离子磷酸盐缓冲溶液；五、将经步骤四处理的乳脂肪初提物，按步骤四的方法重复操作一次，得到处于离心产物上层的乳脂肪；六、在步骤五得到的乳脂肪中，加入与乳脂肪体积相同的超纯水，用磁力搅拌器混合均匀后，在室温条件下进行离心洗涤，得到处于离心产物上层的奶油；其中，离心转速为4800r/min，离心时间为20min；七、将步骤六得到的奶油置于4℃条件下，并在该条件下静置15h，得到奶油固体；八、将步骤七得到的奶油固体置于40～45℃的水浴条件下进行融化，得到液态奶油；九、在步骤八得到的液态奶油中，加入体积为占液态奶油体积0.2％的聚乙二醇辛基苯基醚溶液，在室温条件下进行离心，收集沉淀，得到牦牛乳乳脂肪球膜蛋白；其中，离心转速为44910r/min，离心时间为60min；所述的聚乙二醇辛基苯基醚溶液的配制方法为：按聚乙二醇辛基苯基醚与磷酸盐缓冲液的体积比为1:2.6称取聚乙二醇辛基苯基醚与磷酸盐缓冲液，将二者混合均匀后，置于37℃的水浴中，保持2小时；磷酸盐缓冲液的浓度为0.1mol/L、pH为7.3。