培养基中含腐植酸钠饲料用枯草芽孢杆菌生物制剂的生产

摘要

本发明涉及微生物生物制剂，具体的说是一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法。枯草芽孢杆菌菌株经一级固体种子培养，二级液体种子发酵培养，得菌种液。菌种液接种于葡萄糖、腐植酸钠、豆粕、玉米、麦麸等为主要原料的培养基中进行三级固体有氧发酵，经调整培养条件出芽孢处理，干燥，粉碎，生产出枯草芽孢杆菌生物制剂。制剂含枯草芽孢菌(cfu)≥200亿个/g，pH值5.6～6.6，水分≤10％，粒度≥100目，色泽呈现特有的浅灰色或灰黑色、保质期18个月。本制剂在水产、畜禽养殖中作为添加剂应用，可以提高生产性能，改善养殖环境。

主权项

一种培养基中含腐植酸钠饲料用枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：1) 单菌落种子纯化与优选：将枯草芽孢杆菌斜面菌种,在装有细菌培养基的培养皿上涂布，经培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；2）一级固体种子培养：将步骤1）中得到的单菌落种子，挑出单菌落接种到一级固体种子培养基中，固体种子培养瓶为200ml茄形瓶，装量为固体培养基50ml，经培养，得到一级固体种子；其中，步骤1）和2）所采用的枯草芽孢杆菌固体种子培养基的重量组成为：葡萄糖0.8～1.2%、蛋白胨0.8～1.2%、牛肉膏0.3～0.6%、氯化钠0.03～0.07%、硫酸镁0.03～0.07%、磷酸氢二钾0.05～0.15%、余量为纯净水、pH6.6～7.2、琼脂1.5～2.2%；培养基灭菌条件：0.08MPa、115℃、18 min;培养温度：28℃～32℃,时间为48～72h ；3）二级液体种子发酵培养：将步骤2）中得到的一级固体种子接种到二级发酵罐液体培养基中，一级固体种子与二级发酵罐液体种子培养液的接种量为：一级固体种子与1吨装液量70%的发酵罐接种比例为1瓶：200公斤，经培养，得到二级液体种子；其中所采用的枯草芽孢杆菌种子发酵培养基的重量组成为：葡萄糖0.5～1.5%、蛋白胨0.2～0.8%、酵母粉0.2～0.8%、玉米面1.0～3.0%、豆粕1.0～3.0%、硫酸铵0.1～0.3%、氯化钠0.03～0.07%、硫酸镁0.03～0.07%、磷酸氢二钾0.05～0.15%、余量为纯净水、pH6.6～7.2；灭菌条件：0.1MPa、121℃、20 min;发酵培养条件:罐压0.01～0.10Mpa、通气量0.5～1.0V／V·min、转速100～200rpm 、温度28℃～34℃、时间为48～72h； 4）三级固体发酵料有氧发酵：将步骤3）中得到的二级液体种子接种到固体发酵料中，二级液体种子与固体发酵料混合的重量比例为40：100；经通风供氧，发酵培养, 得到经培养的固体发酵料；所述固体发酵料有氧发酵过程中，固体发酵料中各种原料重量比例为：葡萄糖1～3份、腐植酸钠10～40份、豆粕10～20份、玉米面10～20份、麸皮50～70份；固体发酵料培养条件: 通气量0.5～1.0V／V·min、发酵温度50℃～60℃、发酵时间48～64h；5）出芽孢处理：将步骤4）中得到的固体发酵料进行出芽胞处理, 即对经培养的固体发酵料，停止通风供氧，将其摊开、翻倒，温度降低到20℃～30℃，含水量降低到20%～30%，促使固体发酵料中含有的枯草芽孢杆菌形成芽孢；6) 干燥与粉碎处理：将步骤5）中得到的含有芽胞的固体发酵料进行干燥处理，经干燥炉烘干，微粉机粉碎，生产出培养基中含腐植酸钠的枯草芽孢杆菌cfu≥200亿个/g的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品。