一种适用于烟草种子的RNA提取方法

摘要

本发明属于分子生物学技术领域，具体是一种从烟草种子中提取RNA的方法，其特征在于：实验中先用物理方法除去脂类物质，之后用醋酸钠和异丙醇重复沉淀RNA，并用DNaseI去除RNA中的基因组DNA；最终得到浓度高、质量好、完整性好的RNA。本发明相比现有技术所具备的优点在于：1.提供了一种适合烟草种子总RNA的提取方法。2.有效去除了脂类物质。3.DNaseI除去提取RNA中的基因组DNA污染。4.用NaAc和异丙醇共沉淀去除多糖类物质。5.异丙醇在室温下沉淀RNA能最大程度的降低盐的共沉淀，减少盐类物质对后续实验的影响。6.可大大节约提取时间，实验效果好。

主权项

一种从烟草种子中提取RNA的方法，其特征在于：依次包括以下步骤：1）取适量烟草种子在提前预冷的小研钵中用液氮充分研磨，直至研成细粉末状；2）转移至1.5ml的离心管中，并加入700 µl的RNA提取缓冲液充分混匀，后置于65℃温育10min，剔除漂浮的脂质；3）加入提取缓冲液等体积的氯仿/异戊醇溶液，氯仿∶异戊醇为24∶1，充分震荡混匀；4）4℃，12000×g 离心10 min，取上清；5）所取上清重复3和4步骤，取上清，上清中加入1/10体积的3Mol醋酸钠溶液和与上清等体积的异丙醇，室温放置15 min沉淀RNA；6）4℃，12000×g 离心20min，弃去上清，会发现RNA以片状沉积在离心管底部；7）70% 乙醇洗涤沉淀一次，在超净工作台干燥，无核酸酶的ddH₂O溶解，加入DNaseI 37℃消化20 min，去除RNA中少量的基因组DNA；8）重复加入RNA水溶液1/10体积的3Mol醋酸钠溶液和与RNA水溶液等体积的异丙醇，室温放置15 min沉淀RNA；9）4℃ 12000×g离心20分钟，弃上清；10）70%的乙醇清洗沉淀两次，在超净工作台干燥，加入无核酸酶的ddH₂O溶解。