基于新型悬浮芯片技术的13种呼吸道病毒高通量非诊断性检测方法

摘要

本发明公开了一种基于新型悬浮芯片技术的13种呼吸道病毒高通量非诊断性检测方法，针对流感病毒A、B型，副流感病毒1、3型，冠状病毒SARS-CoV、CoV-NL63、呼吸道合胞病毒A、B型，腺病毒B、E型，鼻病毒、人偏肺病毒、肠道病毒共十三种/型呼吸道病毒的特异性基因序列设计13对引物和相应的特异性探针，经多重PCR扩增及TSPE反应，X-TAG核酸片段、生物素分别标记相应基因片段，标记的片段与相应编码微球结合，悬浮芯片扫描仪检测。能正确检测13种呼吸道病毒及其亚型，各探针间无交叉反应，特异性好、灵敏度高。建立了高通量、快速、准确的可同时检测多种呼吸道病原的技术平台，为突发呼吸道传染病的病原体检测提供技术储备，有利于为应对传染病疫情爆发及时提供信息。

主权项

基于新型悬浮芯片技术的13种/型呼吸道病毒高通量非诊断性检测方法，其特征在于，该非诊断性检测方法具体为： 1)根据解链温度、扩增片段大小、病毒种类，将13种呼吸道病毒及其亚型分为四组：第1组包括PIV3、SARS‑Cov、Inf B、RSVA，第2组包括Inf A、Cov‑NL63，第3组包括AdB、hMPV、HRV，第4组包括RSVB、AdE、PIV1、EnV； 2)多重PCR引物、探针设计与标记，上下游引物上分别标记有X‑TAG和荧光素； 3)进行PCR反应；PCR产物TSPE延伸； 4)将PCR产物结合物分别与相应的编码微球杂交； 5)磁性编码微球上分别偶联有anti‑TAG，编码微球上的Anti‑Tag在一定的条件下特异性捕获PCR产物上的Tag序列； 6)加入链霉亲和素－藻红蛋白，与微球上捕获的PCR产物上的生物素结合，利用悬浮芯片LUMINAX系统进行检测，通过激发微球基质上的红色分类荧光和微球表面经特异性反应结合上的藻红蛋白，对待检测物进行定性和定量分析； 7)多重检测体系的建立及结果判读：以组为单位，混合编码微球，组成多重检测体系；Bio‑Plex悬浮芯片系统读取MFI值，以对待检测物进行分析； 其中，所涉及的引物探针序列为： 。