一种半滑舌鳎伪雄鱼性腺细胞系的构建与应用方法

摘要

本发明的目的在于提供一种海水经济鱼类半滑舌鳎伪雄鱼性腺组织细胞系的建立方法，从而建立半滑舌鳎伪雄鱼性腺组织细胞系，为研究半滑舌鳎性别分化和性别反转调控机制提供基础。本发明的构建方法是利用半滑舌鳎伪雄鱼性腺组织成功建立了半滑舌鳎伪雄鱼性腺细胞系，建立的细胞系可以连续传代，经过这种方法所获得的传代细胞可传60代以上，能提供大量的伪雄鱼性腺细胞。可广泛用于外源基因、质粒的转染，性别相关基因功能的研究，也可用于鱼类常见病毒的繁殖及病毒与细胞相互作用机制的研究，还可以进行环境污染物检测等，具有重要的实际应用价值。

主权项

一种半滑舌鳎伪雄鱼性腺组织细胞系的构建方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)在无菌条件下取下半滑舌鳎伪雄鱼性腺组织，在培养液中将组织剪成小块，将组织块用PBS溶液反复冲洗5次以上；2)离心去掉PBS溶液后，用DMEM/F12无血清培养基悬浮组织块后，均匀接种到培养瓶中，不添加培养液倒置于24℃生化培养箱中；3)干贴结束后补加专用培养液，并将细胞培养瓶正置；4)原代培养过程中每2天更换一半专用培养液，细胞长满单层后进行传代培养，传至60代完成伪雄鱼性腺组织细胞系的构建。