转基因鸡

摘要

本发明涉及从鸟PGC长期培养物而获得的转基因鸡和其生产技术以及源于长期PGC培养物的转基因鸟。在一些实施方案中，这些PGC可用遗传构建体转染以修饰PGC的DNA，尤其是引入编码外源蛋白质的转基因。当通过已知方法与宿主鸟胚组合时，那些修饰PGC通过种系传递从而产生转基因后代。本发明包括包含可通过基因打靶进行遗传修饰的PGC的长期培养物的组合物，其可接受大量的外源DNA并向受体胚胎的种系作贡献。

主权项

一种产生转基因鸡的方法，其包括：通过传代将阶段14‑17胚胎的全血培育在培养基中一段时间，所述时间足够所述全血中所含的原始生殖细胞在培养基中相对于其他鸡细胞更具优势地生长，所述培养基用布法罗大鼠肝(BRL)细胞条件化处理，并含有FGF、干细胞因子、鸡血清、胎牛血清和STO细胞，由此产生能够定居于受体鸡胚胎种系的培养的原始生殖细胞，其中所培养的能够定居于受体鸡胚胎种系的原始生殖细胞保持圆形形态，保持不贴壁，表达CVH和Dazl mRNA，表达CVH蛋白，在使之附着且从培养基中去除FGF、干细胞因子和鸡血清时产生胚胎生殖细胞，以及表达端粒酶；将大于10kb的转基因稳定掺入培养的原始生殖细胞的基因组中，将该原始生殖细胞插入阶段12‑17的受体鸡胚胎，和孵化转基因鸡。