一种小分子量方格星虫纤溶酶及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种小分子量方格星虫纤溶酶及其制备方法与应用。本发明提供了一种方格星虫纤溶酶的制备方法，包括如下步骤：1）将方格星虫的内脏与磷酸缓冲液混匀后匀浆，离心收集上清液A；2）向所述上清液A加入硫酸铵进行盐析，收集沉淀，即得到小分子方格星虫纤溶酶。本发明的实验证明，本发明提供的方法为从方格星虫中提取纤溶酶，且该纤溶酶的分子量为24917Da、等电点为3.211；与目前现有的纤溶酶相比，分子量小，更易于合成相关药物。

主权项

一种制备方格星虫纤溶酶的方法，包括如下步骤：1)将离体的方格星虫内脏依次进行匀浆、盐析，收集盐析产物；2)将所述盐析产物依次经离子交换柱层析和凝胶柱层析，得到方格星虫纤溶酶；所述离子交换柱层析为阴离子交换柱层析；所述阴离子交换柱层析为将所述盐析产物流经阴离子交换柱，用含0.1‑1M NaCl的浓度为0.02M、pH值为7.8的Tris‑HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，检测阴离子交换柱洗脱产物活性，收集具有活性的阴离子交换柱层析洗脱产物；所述线性梯度洗脱的时间为20h，所述线性梯度洗脱的流速为0.5mL/min；所述收集具有活性的阴离子交换柱层析洗脱产物为每10min收集一管洗脱产物，收集第45‑50管洗脱产物；所述凝胶柱层析为将所述阴离子交换柱洗脱产物流经葡聚糖凝胶柱，用浓度为0.02M、pH值为7.5的PBS缓冲液洗脱，检测葡聚糖凝胶柱洗脱产物活性，收集具有活性的凝胶柱层析洗脱产物；所述洗脱的时间为6h，所述洗脱的流速为1mL/min；所述收集具有活性的凝胶柱层析洗脱产物为每10min收集一管洗脱产物，收集第18‑22管洗脱产物；所述阴离子交换柱为DEAE‑Sepharose FF；所述葡聚糖凝胶柱为Sephadex G‑50。