一种柠檬酸杆菌溶藻基因的获取方法

摘要

本发明公开了一种柠檬酸杆菌溶藻基因的获取方法，通过Tail-PCR以及常规PCR技术克隆出了柠檬酸杆菌中的溶藻关键基因。本发明通过转座子以基因重组方式整合到细菌基因组上，从而制备出其突变株，进而使用Tail-PCR克隆出插入位点，克隆出上游基因，再根据上游基因与CitrobacterfreundiiCFNIH1基因组中glucose-1-phosphateadenylyltransferase基因设计一对引物，通过PCR扩增后得到溶藻基因下游基因，将上游基因和下游基因拼接，得到完整的柠檬酸杆菌溶藻基因。

主权项

一种柠檬酸杆菌溶藻基因的获取方法，其特征在于，该方法具体为：以柠檬酸杆菌突变株基因组为模板进行tail‑PCR，扩增出柠檬酸杆菌中转座子插入位点，得到长度为559bp的上游基因，该上游基因序列如SEQ ID NO.5所示，进一步通过PCR扩增技术克隆出其完整下游基因，该下游基因序列如SEQ ID NO.20所示，将上游基因和下游基因拼接，得到完整的柠檬酸杆菌溶藻基因，该基因序列如SEQ ID NO.6所示。