一种大叶藻野生外植体获取方法

摘要

本发明涉及一种大叶藻野生外植体的获取方法，步骤是：在大叶藻长势旺盛的海域将其植株挖出，就地清洗根、茎上底泥，在室内将克隆幼苗从主枝上折下，放入天然海水中，于光照培养箱中暂养，3-5天后将天然海水换为灭菌天然海水继续培养；5天后，选出根状茎含有5个节以上幼苗，于超净工作台上进行修剪；将修剪后的幼苗先用灭菌海水洗3-5次，再放入10％的过氧化氢溶液中浸泡15分钟，灭菌海水再洗5次；将消毒过的幼苗进行再修剪以获得目的外植体，如根尖、茎尖或根状茎，用于接种。本发明保障了大叶藻组织培养中以野生植株为外植体供体时初代培养中的低污染率和低致死率，为大叶藻组织培养的成功提供了最基本的技术支持。

主权项

一种大叶藻野生外植体获取方法，其特征在于获取的具体步骤如下：（1）克隆片段的野外采集：选择海域环境良好、大叶藻长势旺盛的海域，将大叶藻植株挖出，就地清洗根茎上的底泥，将带有多个克隆小苗的克隆片段在冷藏条件下带回实验室；（2）克隆小苗的室内暂养：将克隆幼苗从与主枝上折下，放入装有天然海水的1000ml烧杯中，于光照培养箱中培养，3‑5天后将天然海水换为灭菌天然海水继续于培养箱中培养；（3）外植体供体选择和修剪：灭菌海水中培养5天后即可进行外植体选择，将根状茎含有5个节以上的克隆幼苗选出，于超净工作台上进行修剪；（4）外植体消毒：将修剪后的小苗先用灭菌天然海水冲洗3‑5次，再放入10％的过氧化氢溶液中浸泡15分钟，用灭菌海水冲洗5次；（5）外植体再修剪：在接种前，将消毒过的幼苗进行再修剪，以获得目的外植体，如根尖、茎尖或根状茎，用来接种。