共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球及其在生产葡萄糖酸或其盐中的应用

摘要

本发明公开了一种共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球及其在催化氧化葡萄糖制备葡萄糖酸（盐）中的应用。本发明的共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球能有效促进载体和酶分子的共价连接，大大提高了固定化效率，并且显著延长了共固定化GOD/CAT的使用寿命，可反复使用次，生产成本低，有利于可持续发展，采用本发明的共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球制备葡萄糖酸盐收率高，反应条件温和，设备简单易得，是一种绿色环保的生产方法。

主权项

一种共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球，其通过包括如下步骤的方法所制备而成： （1）以具有大孔结构PGMA微球为载体，所述的微球的平均孔径介于100‑200nm之间，以1‑5%（v/v）乙二胺溶液为氨基化试剂，按载体质量：氨基化试剂体积1:40将载体分散于氨基化试剂中，在pH7‑9，40‑80℃下振荡反应1‑6h，收集氨基化载体；（2）按照葡萄糖氧化酶：过氧化氢酶的活力比为1:1‑6的比例，将GOD和CAT溶解于pH5‑8的磷酸缓冲液中；在酶溶解液中加入碳二亚胺以及N‑羟基琥珀酰亚胺，0‑8℃下反应15‑60min，然后将氨基化载体分散于酶液中，25‑35℃下搅拌反应1‑10h；（3）在步骤（2）反应液中加入1‑5倍反应液体积的丙酮和0.1‑2.0%（v/v）交联剂，继续反应0.5‑1.5h，将上述反应液进行过滤，弃滤液，收集固形物，用磷酸缓冲液或水洗涤3‑5次，干燥得到共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球。