主权项 |
一种人羊膜的脱细胞方法,其特征在于包括以下具体过程:(1)、将新鲜的人胎盘羊膜除去血块和绒毛膜,留下包含上皮细胞层、基底膜和无血管基质的完整羊膜组织,并以PH值为7.4的PBS清洗,得到一干净半透明的羊膜;(2)、取体积浓度为75%的酒精将上述得到的半透明羊膜漂洗1~2次,再用PBS漂洗2~4次,然后将青霉素和链霉素混合到PBS中形成双抗/PBS溶液,所述的青霉素和链霉素又叫双抗,其中青霉素与链霉素在PBS中的含量均为100~300U/L,再将半透明羊膜按体积比为1:1~1:3的比例置于双抗/PBS溶液中浸泡震荡,每12小时换液一次,共两次;(3)、将双抗、表面活性剂混合到PBS中形成综合PBS溶液,其中:青霉素与链霉素在PBS中的含量均为100~300U/L,表面活性剂占PBS的重量比为1%,并将半透明羊膜按体积比为1:1~1:3的比例置于综合PBS溶液中浸泡震荡,每6~8小时换液一次,共两次,然后将半透明羊膜取出,用PBS漂洗1~2次;(4)、将半透明羊膜浸泡在胰脂酶含量为500~5000U/L的胰脂酶/PBS溶液中,半透明羊膜与胰脂酶/PBS溶液的体积比为1:1~1:3,并在溶液温度为30~40℃下处理10~20小时,然后将半透明羊膜取出用PBS漂洗1~2次,再将半透明羊膜浸泡在DNA酶含量为1000~3000U/L的DNA酶/PBS溶液中,半透明羊膜与DNA酶/PBS溶液的体积比为1:1~1:3,在溶液温度为30~40℃下处理3~5小时;(5)、将半透明羊膜从DNA酶/PBS溶液中取出,并将半透明羊膜置于青霉素与链霉素含量均为100~300U/L的双抗/PBS溶液中震荡漂洗,每12小时换液一次,共两次,最后将脱细胞后的半透明羊膜取出放到PBS中,在4℃的温度下保存待用。 |