甘薯胚性细胞悬浮培养方法及通过该方法得到的胚性细胞

摘要

本发明涉及一种甘薯胚性细胞的悬浮方法，其主要特征是将甘薯胚性愈伤组织按接种密度0.5∶25-4.0∶25(SCV：total ml of suspension culture)放入置于100r/min摇床的、含2.0mg/L2，4-D的MS液体培养基的培养瓶中培养。通过这种培养方法培养的胚性悬浮细胞7天后即可增殖到原来的1.6-3.96倍左右，且胚性悬浮细胞质量非常好；特别是当接种密度为2.0∶25时，其培养的效率最高，7天后可增殖到原来的3.96倍。

主权项

一种甘薯胚性细胞的悬浮培养方法，其特征在于：取苗床生长旺盛、长1cm的徐55‑2茎尖，用70％的酒精表面杀毒30s后立即转入0.1％HgCl23min，而后用无菌蒸馏水充分洗净；在解剖显微镜下剥取约0.5‑1.0mm的茎尖分省组织，而后接种在含2.0mg/L2，4‑D的MS培养基上，在28±2℃、黑暗条件下进行培养，诱导胚性愈伤组织；培养8周后，将诱导得到的胚性愈伤组织破碎成小细胞团，转入100mL三角瓶中，加入20mL含2，4‑D的MS液体培养基，该培养基的成分同上述胚性愈伤组织诱导培养基，但是不加琼脂；将三角瓶放在水平摇床上进行振荡培养，培养条件为28±2℃，每天13h、500lx光照；悬浮培养7‑10天继代一次；将2.0mLSCV(SCV：total ml of suspension culture)胚性悬浮培养细胞接入25mL含2.0mg/L2，4‑D的MS液体培养基中，置于100r/min摇床上培养，培养条件为28±2℃，每天13h、500lx光照；通过这种培养方法培养的胚性悬浮细胞7天后即可增殖到原来的3.96倍。