一种检测P53基因突变的引物和探针

摘要

一种基因突变的检测方法,主要是针对等位基因特异引物PCR扩增法的缺点，利用分子克隆技术，事先分别构建含待检基因野生型和突变型的重组质粒，以此重组质粒为阳性模板，筛选确定特异地分别与3'末端突变位点或野生位点碱基互补的两条特异引物，一旦筛选出的特异引物序列，将是我们检测体系的关键元素。我们将以重组质粒为阳性模板，制备定量标准曲线，从而对待检标本进行准确定量。本发明的产品，可用于任何型号的荧光定量PCR仪，试剂成本同如今市面上的荧光定量PCR试剂相当，因此较好地克服了等位基因特异引物PCR扩增法的不足。

主权项

一种检测P53基因突变的引物和探针，其特征在于，所述引物为：克隆引物：P53‑R175H‑F:GCCATCTACAAGCAGTCACAGCP53‑R175H‑R:GGGGACCCTGGGCAAC突变引物：上游P53‑R175H‑qc‑F：GGAGGTTGTGAGGCACTGCCCCCACCATG下游P53‑R175H‑qc‑R：CATGGTGGGGGCAGTGCCTCACAACCTCC野生型引物：P53‑R175H‑WT‑F:CATGACGGAGGTTGTGAGGCG突变特异型引物：P53‑R175H‑mut‑F5:GACGGAGGTTGTGAGCCAP53‑R248W‑mut‑F:ATGGGCGGCATGATCTP53‑R249S‑mut‑F:GGCATGAACCGGTGTP53‑R273H‑mut‑F:GGAACAGCTTTGAGGTCCAP53‑R282W‑mut‑F:GCCTGTCCTGGGAGAGTCT所述探针为Taqman特异性探针，其核苷酸序列为：P53‑R175H‑Probe:FAM‑CCTGTCGTCTCTCCAGCCCCAG‑Iowa Black。