猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗及其制备方法

摘要

本发明提供了猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗的制备方法：(1)在潮汐式生物反应器中，接种动物细胞至生物反应器内的微载体上，进行细胞的吸附培养与扩增培养过程；(2)将猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒接种到扩增培养的细胞上，进行病毒的吸附培养与增殖培养过程；(3)在接种的动物细胞CPE达到75％以上时，收获病毒液；(4)将收获的病毒培养液于-20℃冻融两次，浓缩后灭活，加入乳化剂，乳化后获得猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗。本发明的优点是保藏的种毒的免疫原性好、生长稳定、效价高；采用了潮汐式生物反应器，分别培养和收获高滴度的二种病毒，浓缩灭活后直接乳化配制，可以大规模连续生产二联灭活疫苗。

主权项

一种猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)在潮汐式生物反应器中，接种动物细胞至生物反应器内的微载体上，进行细胞的吸附培养；2)在细胞的吸附培养结束后进行细胞的扩增培养，将猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒分别接种到扩增培养的细胞上，进行病毒的吸附培养，其中，所述猪乙型脑炎病毒为SD‑2011株，保藏号为CCTCC No.V201119，所述培养猪乙型脑炎病毒的动物细胞为BHK‑21、IBRS‑2、ST、Vero、C6/36及鸡胚成纤维细胞；所述猪细小病毒为HN‑2011株，保藏号为CCTCC No.V201118，所述猪细小病毒的培养细胞为ST、PK‑15、IBRS‑2、CPK和MVPK细胞；3)在病毒的吸附培养结束后分别进行病毒的增殖培养；4)在接种的动物细胞病变CPE达到75％以上时，分别收获病毒液；5)将收获的病毒培养液于‑20℃冻融两次，浓缩后分别灭活，获得灭活的猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒混合液；6)进行水相与油相的配置：将猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒混合液作为水相，加入乳化剂，乳化后获得猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗。