全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法

摘要

本发明公开的全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法，具体按照以下步骤实施：1）制备多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管；2）采用京尼平和乙醇混合溶液对制得的多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管进行交联及消毒处理；3）种子细胞的培养与纯化；4）制备无菌的全氟三乙胺乳液；5）将经配制的全氟三乙胺乳液与经步骤3）得到的种子细胞混合，并用双筒等量注射器注射到消毒后的多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管内，得到本发明的全氟三丁胺乳液与种子细胞复合的神经导管。本发明的全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法解决了现有神经导管联合种子细胞修复长节段神经缺损时出现的早期氧供不足的问题。

主权项

全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1、制备多微孔可降解胶原‑壳聚糖神经导管：步骤1.1、分别称取I型胶原蛋白和壳聚糖，I型胶原蛋白和壳聚糖的质量比为1～8:1；步骤1.2、将经步骤1.1称取的I型胶原蛋白放入冰醋酸中，将壳聚糖放入醋酸溶液中，待I型胶原蛋白和壳聚糖都充分溶解后形成两种悬浊液，混合两种悬浊液配制出I型胶原‑壳聚糖凝胶状悬浊液：步骤1.2.1、配制醋酸溶液，每毫升的醋酸溶液中含有140mg醋酸；步骤1.2.2、按步骤1.1中称取的I型胶原蛋白的质量取冰醋酸，每克I型胶原蛋白加入10ml的冰醋酸溶液，将量取的冰醋酸与I型胶原蛋白混合，经22h～26h的溶解处理，制得I型胶原蛋白和冰醋酸的悬浊液；按步骤1.1中称取的壳聚糖的质量取步骤1.2.1中配制的醋酸溶液，每克的壳聚糖加入37ml的冰醋酸溶液，将量取的醋酸溶液与壳聚糖混合，经22h～26h的溶解处理，制得壳聚糖和醋酸的悬浊液；步骤1.2.3、将经步骤1.2.2得到的I型胶原蛋白和醋酸的悬浊液与壳聚糖和醋酸的悬浊液混合在一起，于2℃～6℃条件下，恒温搅拌处理70min～110min，得到混合悬浊液；步骤1.2.4、将经步骤1.2.3得到的混合悬浊液先进行抽真空处理，之后再静置10h～14h，得到I型胶原‑壳聚糖凝胶状悬浊液；步骤1.3、将经步骤1.2.4配制的I型胶原‑壳聚糖凝胶状悬浊液倒入神经导管成形模具中，进行注模和冷淋固形处理：步骤1.3.1、将经步骤1.2.4得到的I型胶原‑壳聚糖凝胶状悬浊液注入神经导管成形模具中，以小铁夹固定神经导管成形模具的两端；步骤1.3.2、在微型调速仪作用下，以垂钓的方式将神经导管成形模具顺轴向以1.2×10^‑3m/s的速度缓慢浸入液氮中，对注入神经导管成形模具中的I型胶原‑壳聚糖凝胶状悬浊液进行冷淋固形处理，待神经导管成形模具完全浸入液氮后，继续在液氮中保留10h～14h；步骤1.3.3、经步骤1.3.2，将神经导管成形模具连同内部注入的I型胶原‑壳聚糖凝胶状悬浊液一同转入‑90℃～‑70℃的冰箱中冷藏；步骤1.4、制备出多微孔可降解胶原‑壳聚糖神经导管：步骤1.4具体按照以下步骤实施：步骤1.4.1、将神经导管成形模具从‑90℃～‑70℃的冰箱取出，迅速去除神经导管成形模具两端的铁夹和铜管；步骤1.4.2、经步骤1.4.1，将神经导管成形模具放置于预冷好的冷冻干燥机中冻干46h～50h，其中冷冻干燥机设置的预冷参数为：‑60℃、100mtorr；步骤1.4.3、将经步骤1.4.2冻干处理后的神经导管成形模先具放置于真空状态下并升温至0℃，保持5.5h～6.5h，之后再升温至20℃～24℃，保持30min～60min，解除真空状态，最后升至常温；步骤1.4.4、经步骤1.4.2和步骤1.4.3冻干成形处理后，将神经导管从神经导管成形模具中取出，按不同的要求，裁剪成不同长度的神经导管，即制备得到多微孔可降解胶原‑壳聚糖神经导管；步骤2、采用京尼平和乙醇混合溶液对经步骤1制得的多微孔可降解胶原‑壳聚糖神经导管进行交联及消毒处理；步骤3、种子细胞的培养与纯化；步骤4、制备无菌的全氟三乙胺乳液；步骤5、将经步骤4配制的全氟三乙胺乳液与经步骤3得到的种子细胞混合，并用双筒等量注射器注射到步骤2得到的消毒后的多微孔可降解胶原‑壳聚糖神经导管内，得到全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管,具体按照以下步骤实施：步骤5.1、凝血酶溶液和纤维蛋白原溶液的制备：将凝血酶冻干粉与凝血酶溶解液混合，每毫升的凝血酶溶解液中加入0.02g的凝血酶冻干粉，制成凝血酶溶液；将纤维蛋白原干粉与纤维蛋白原溶解液混合，每毫升的纤维蛋白原溶解液中加入0.16g纤维蛋白原干粉，制成纤维蛋白原溶液；步骤5.2、将经步骤4配制的全氟三乙胺乳液加入到步骤5.1制备的凝血酶溶液中，其中无菌的全氟三乙胺乳液与凝血酶溶液的体积比是1～4:8～1，制备出全氟三乙胺乳液‑凝血酶的混合溶液；步骤5.3、将步骤3中制备出的纯化后的嗅鞘细胞加入到步骤5.2配制的全氟三乙胺乳液‑凝血酶的混合溶液中，制成每毫升全氟三乙胺与水凝胶‑凝血酶的混合溶液中含有10⁴～10⁶个嗅鞘细胞的混合溶液A；步骤5.4、量取等体积的混合溶液A与纤维蛋白原溶液，将混合溶液A置于双筒等量注射器的一个注射筒内，将纤维蛋白原溶液置于双筒等量注射器的另一个注射筒内，推动注射筒的顶部，混合溶液A与纤维蛋白原溶液在双筒等量注射器前端开始反应，形成胶状混合物，双筒等量注射器再将形成的胶状混合物注射入经步骤2得到的消毒后的多微孔可降解胶原‑壳聚糖神经导管内，即得到本发明的全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管。