一种定量检测血浆中益母草碱含量的方法

摘要

本发明属于医药检测技术领域，涉及一种定量检测血浆中益母草碱含量的方法。本方法采用高效液相色谱串联质谱技术，用苯甲酰精氨酸乙酯作为检测物的内标，用高氯酸沉淀蛋白方法预处理血浆样品，按内标法以峰面积，计算血浆中益母草碱血药浓度；其中，液相色谱采用安捷伦ZorbaxSB-C18柱为固定相，乙腈/乙酸铵缓冲液混合液为流动相，进行等度洗脱，质谱采用电喷雾电离源，用多离子反应监测对益母草碱定量；本方法中的益母草碱的最低定量限达4ng/mL。本发明对样品检测的专一性强，灵敏度高，操作简便，各项方法学考证指标均能达到药典的相关技术要求，可用于益母草碱口服给药后药代动力学研究。

主权项

一种定量检测血浆中益母草碱含量的方法，其特征在于，采用高效液相色谱串联质谱技术，用苯甲酰精氨酸乙酯作为检测物的内标，用高氯酸沉淀蛋白方法预处理血浆样品，按内标法以峰面积，计算血浆中益母草碱血药浓度；所述的益母草碱分子式为C₁₄H₂₁N₃O₅，分子量为311，结构式为：包括以下步骤：步骤一样品预处理采用质量比为10％的高氯酸作为血浆沉淀蛋白剂进行血浆预处理；步骤二液相分离(1)流动相：由体积比为25％的乙腈与75％的乙酸铵缓冲液组成；(2)色谱柱：采用安捷伦Zorbax SB‑C18柱，色谱柱内径2.1mm，填料粒径5μm，色谱柱长度150mm；(3)洗脱方法：采用等度洗脱，流速0.2mL/min，色谱柱温度为27℃；步骤三质谱检测采用正离子电喷雾电离源模式，用多离子反应监测，离子选择通道：益母草碱(m/z)⁺312.2/181.1，内标为(m/z)⁺307.3/105.0，离子通道范围为±1.0amu；步骤四浓度检测方法和检测限按内标法以峰面积计算血中益母草碱的含量；其中，最低定量限为4ng/mL，定量范围为4‑256ng/mL，线性相关系数在0.995以上，定量下限精密度小于20％，其余质控批内、批间精密度均小于15％，准确度85％‑115％。