检测纤维二糖酶活性的方法

摘要

本发明公开了一种检测纤维二糖酶活性的方法，其是将一种可用于检测纤维二糖酶活性的纳米金探针溶液按照20∶1的体积比加入到待测溶液中，其中每20体积的纳米金探针溶液中含有2～4体积的纳米金探针浓缩液，将检测温度控制在30℃～35℃，检测pH值控制在4.0～4.5，待纳米金探针反应完全后，根据检测后溶液体系中纳米金探针表面等离子体共振吸收峰强度变化，即可判断待测溶液中是否含有纤维二糖酶；纳米金探针包括纳米金颗粒，所述纳米金颗粒上修饰有纤维二糖和6-巯基己-1-醇。本发明的方法具有快速、灵敏、精确、且对环境无害、成本低廉等优点。

主权项

一种检测纤维二糖酶活性的方法，该方法包括以下步骤：将一种可用于检测纤维二糖酶活性的纳米金探针溶液按照20∶1的体积比加入到待测溶液中，其中每20体积的纳米金探针溶液中含有2～4体积的纳米金探针浓缩液，将检测温度控制在30℃～35℃，检测pH值控制在4.0～4.5，待纳米金探针反应完全后，根据检测后溶液体系中纳米金探针表面等离子体共振吸收峰强度变化，即可判断待测溶液中是否含有纤维二糖酶；所述纳米金探针包括纳米金颗粒，所述纳米金颗粒上修饰有纤维二糖和6‑巯基己‑1‑醇；所述纤维二糖酶活性与纳米金探针表面等离子体共振吸收峰强度呈线性关系，所述线性回归方程为A=0.3642n+0.6273，其中A为紫外可见光吸收图谱中620nm处的吸光度与520nm处的吸光度比值，根据检测得到的吸光度比值A即可得到酶活相关值n，再根据表达式C=1.5×10ⁿ即可定量测得待测溶液中的纤维二糖酶酶活C，C的量纲为U/mL；所述纳米金探针主要由以下方法制备得到：在配好的纤维二糖溶液中加入氯金酸溶液和硼氢化钠溶液，充分混匀且反应完全后，将得到的反应产物低速离心纯化以去除沉积颗粒，再于上清液中加入6‑巯基己‑1‑醇进行培养，培养完成后高速离心纯化，将高速离心后的沉淀重溶于超纯水中，得到含有可用于检测纤维二糖酶活性的纳米金探针的溶液；所述氯金酸、硼氢化钠、纤维二糖的摩尔用量比为1∶（16.3～18.4）∶（1.2～6）；所述氯金酸与6‑巯基己‑1‑醇的摩尔用量比为1∶（0.002～0.004）。