一种微型月季花诱导方法

摘要

本发明属于细胞工程技术领域，涉及一种微型月季花诱导方法，公开了一种通过高效、快速诱导微型月季花芽的方法，包括：无菌苗的获取，花芽诱导培养，成花培养等步骤。本发明首次以盆栽微型月季为植物材料，在其茎段离体再生体系中，最后确定微型月季开花诱导的最适培养基为：MS+TDZ1.0mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7.2g/L，成功诱导试管苗开花并将开花率提高至87.1%，并成功培育出体态娇小，色泽艳丽的超微月季试管苗，对月季无性育种具有重要的理论和实践意义。

主权项

一种微型月季花诱导方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）无菌苗的获取：①取在温室或苗圃培育的月季盆栽苗的当年生枝条，以软毛刷去除表面灰尘后，置于盛有清水的器皿中；②加入1滴蓝月亮牌洗洁精浸泡枝条30min，并不断摇动烧杯，流水冲洗1h，用滤纸吸干纸条表面水分，备用；③将步骤②清洗后的月季枝条剪取长度为3cm左右的微型月季茎段，用C1₂灭菌30min，在超净工作台中，无菌蒸馏水浸泡清洗3次，再无菌滤纸吸干，备用；④配制芽诱导及增殖培养基：MS+TDZ1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+活性炭0.6g/L，pH为5.83‑5.85，经121℃高压灭菌20min；⑤将灭菌后的1L培养基平均盛放在20个植物组织培养瓶中，待培养基冷凝至室温；⑥将步骤③备用的灭菌后的茎段剪取为1.5cm左右，形态学下端接种于步骤⑤分装好的芽诱导及增殖培养基中，每1个植物组织培养瓶中接种4个茎段，接种后标注日期，置于智能人工气候箱中培养30天；⑦智能人工气候箱的培养条件为：25℃，光强2000lux，光周期为16小时光照，8小时黑暗，从而获得无菌苗；（2）花芽诱导培养：①在超净工作台中，切取生长健壮的微型月季组培苗单芽茎段，形态学下端接种于6种蔗糖浓度的花芽诱导培养基中；②此6种花芽诱导培养基分别为：YJ1:MS+TDZ1.0mg/L+琼脂7.2g/L+蔗糖70g/L；YJ2:MS+TDZ1.0mg/L+琼脂7.2g/L+蔗糖65g/L；YJ3:MS+TDZ1.0mg/L+琼脂7.2g/L+蔗糖55g/L；YJ4:MS+TDZ1.0mg/L+琼脂7.2g/L+蔗糖40g/L；YJ5:MS+TDZ1.0mg/L+琼脂7.2g/L+蔗糖30g/L；YJ6:MS+TDZ1.0mg/L+琼脂7.2g/L+蔗糖15g/L；③上述花芽诱导培养基pH均为5.83‑5.85，经121℃高压灭菌20min后，每1L培养基倒20个植物组织培养瓶，待培养基冷凝至室温；④接种步骤①中切取的微型月季组培苗单芽茎段分别接种到6种培养基中，每1个植物组织培养瓶中接种5个茎段，每种培养基接种10瓶，接种后标注日期，置于智能人工气候箱中培养40天；⑤培养条件为：25℃，光强2000lux，光周期为16小时光照，8小时黑暗，获得微型月季的丛生芽；（3）成花培养：①将在6种花芽诱导培养基中培养40天的微型月季丛生芽切取为单丛，接种于芽增殖培养基：MS+TDZ1.0mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭0.6g/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L（pH为5.83‑5.85）中；②在芽增殖培养基的植物组织培养瓶上，对来自6种花芽诱导培养基中微型月季丛生芽做好标记，置于人工气候箱中培养10天，诱导微型月季开花；③培养条件为：25℃，光强2000lux，光周期为16小时光照，8小时黑暗；10天后统计结果。