桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取方法

摘要

本发明公开了一种桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取方法，包括：步骤一发酵，将桑叶加入纤维素酶产生菌种子液中，恒温振荡培养得到发酵液；提取：步骤二离心发酵液，下层沉淀与盐酸水溶液恒温浸提后离心，取上层提取液；下层沉淀重复上述操作；合并提取液；步骤三纯化，用大孔树脂除杂质，用无水乙醇洗脱1脱氧野尻霉素，减压蒸馏除去无水乙醇，冷冻干燥得到成品1脱氧野尻霉素。本发明提供的一种桑叶中1脱氧野尻霉素的提取方法提取效率高、成本低。

主权项

一种桑叶中1‑脱氧野尻霉素的提取方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)发酵：将桑叶加入纤维素酶产生菌种子液中，恒温振荡培养得到发酵液；所述纤维素酶产生菌种子液由纤维素酶产生菌于产酶培养基中恒温振荡培养制得，所述纤维素酶产生菌为里氏木霉(Trichoderma reseei)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、绿色木霉(Trichoderma viride)或黑曲霉(Aspergillus niger，DSMZ821)；所述产酶培养基的配方为：葡萄糖1～3g/L，微晶纤维素2～3g/L，蛋白胨1～2g/L，(NH₄) ₂SO₄2～3g/L，KH₂PO₄3～4g/L，尿素0.4～0.6g/L，CaCl₂·2H₂O0.6～1.0g/L,MgSO₄·7H₂O0.4～0.8g/L，FeSO₄·7H₂O0.7～1.1×10^‑2g/L,MnSO₄·H₂O2.6～4.8×10^‑3g/L,ZnSO₄·H₂O2.6～4.0×10^‑3g/L,CoCl₂·6H₂O5.0～8.0×10^‑3g/L，吐温800.3～0.5g/L，其余为水，pH为5.0～7.0；培养温度为28～35℃，振荡速度为150～180r/min，培养时间为6～24h；每100mL纤维素酶产生菌种子液中加入桑叶0.2‑1.0g； (2)提取及纯化：采用酸提取法或醇提取法提取发酵液，将所得提取液纯化，得到1‑脱氧野尻霉素；所述酸提取法包括以下步骤：离心发酵液，下层沉淀与酸水溶液恒温浸提后离心，取上层提取液，下层沉淀重复上述操作，合并提取液，所述酸水溶液为盐酸水溶液，所述盐酸水溶液的浓度为0.03～0.07mol/L，每100mL盐酸水溶液中加入1‑3g沉淀，浸提温度为60‑80℃；所述提取液纯化包括以下步骤：提取液加入三氯乙酸水溶液后离心，所得上清液经大孔吸附树脂分离，洗脱剂为无水乙醇，浓缩洗脱液，即得1‑脱氧野尻霉素。