一种葡萄糖异构酶的固定化方法

摘要

本发明公开了一种葡萄糖异构酶的固定化方法，属于生物工程技术领域。本发明构建了产葡萄糖异构酶的重组大肠杆菌xylA/pET24a/BL21(DE3)，以该重组菌作为生产菌株，固定化后葡萄糖异构酶的酶活为2579U/g，酶活回收率达到70.5%，添加金属离子后，75℃下半衰期为29h，较不添加金属离子（半衰期为4h）提高了6.3倍；在相同的转化时间内，以50%葡萄糖为底物连续操作10次，其相对转化率为71%。该固定化方法简单易行，固定化成品颗粒的性能优异，为工业化应用提供参考。

主权项

一种葡萄糖异构酶的固定化方法，其特征在于，步骤如下：1)在初始培养基中添加适量的Co²⁺发酵生产葡萄糖异构酶；2)将步骤1)中所述发酵液与壳聚糖溶液混合使菌体絮凝；3)向絮凝物中加入戊二醛进行交联，挤压成型后烘干过夜；具体步骤如下：1)向重组大肠杆菌xylA/pET24a/BL21(DE3)发酵初始培养基中添加0.5‑6mM的Co²⁺，培养至菌体浓度OD₆₀₀为9‑10；2)向发酵液中添加0.1‑0.8％的硅藻土；3)将步骤2)得到的发酵液与0.01‑0.1％的壳聚糖溶液混合，静置使菌体絮凝；4)向絮凝物中加入0.2‑3％戊二醛进行交联，交联一定时间后弃去上清液，挤压成型后烘干。