一种利用L-赖氨酸2-单加氧酶和δ-戊酰胺水解酶催化制备5-氨基戊酸的方法

摘要

本发明公开了一种利用L-赖氨酸2-单加氧酶和δ-戊酰胺水解酶催化制备5-氨基戊酸的方法，是对含L-赖氨酸2-单加氧酶DavB和δ-戊酰胺水解酶DavA的工程菌细胞悬液中蛋白进行分离纯化，分别得到L-赖氨酸2-单加氧酶DavB和δ-戊酰胺水解酶DavA，然后将其作为催化剂与L-赖氨酸水溶液混合，使混合物中L-赖氨酸的浓度为20～40克/升，DavA蛋白浓度为0.1～1.0克/升，DavB蛋白浓度为0.1～1.0克/升；然后在30～42℃、pH6.5～7.5条件下，并以180转/分钟振荡催化反应，得到含5-氨基戊酸的转化液。本发明解决了全细胞催化副产物多，分离纯化难度大的问题，具有反应液组成简单，产物浓度高，便于提取分离等优势，适于推广和工业化生产。

主权项

一种利用L‑赖氨酸2‑单加氧酶和δ‑戊酰胺水解酶催化制备5‑氨基戊酸的方法，步骤是：（1）将能表达L‑赖氨酸2‑单加氧酶DavB和δ‑戊酰胺水解酶DavA的工程大肠杆菌发酵培养，获得含L‑赖氨酸2‑单加氧酶DavB和δ‑戊酰胺水解酶DavA的工程菌细胞悬液；（2）对步骤（1）获得的细胞悬液中蛋白进行分离纯化，分别得到L‑赖氨酸2‑单加氧酶DavB和δ‑戊酰胺水解酶DavA；（3）将L‑赖氨酸2‑单加氧酶DavB和δ‑戊酰胺水解酶DavA作为催化剂与L‑赖氨酸水溶液混合，使混合物中L‑赖氨酸的浓度为20～40克/升，DavA蛋白浓度为0.1～1.0克/升，DavB蛋白浓度为0.1～1.0克/升；然后在30～42℃、pH6.5～7.5条件下，并以180转/分钟振荡催化反应16～24小时，得含5‑氨基戊酸的转化液；（4）采用异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法进行5‑氨基戊酸的浓度检测，算出产率。