一种液相色谱-质谱联用对烟草中类黄酮物质进行分离鉴定的方法

摘要

本发明公开了一种液相色谱-质谱联用对烟草中类黄酮物质进行分离鉴定的方法。将样本研磨，干燥，按0.1ml/mg样本的量加提取剂提取，离心，收集上清液，按0.5ml/ml、1ml/ml上清液的量加入水和氯仿离心，取上清液进行分析。以153⁺、151^-为特征离子进行扫描，对结果提取母离子进行二级质谱扫描，得到的谱图与谱库对比确定化学结构再与标准物进行验证。以上述已鉴定物质及杨梅素、二氢杨梅素、儿茶素/表儿茶素、黄豆苷元、黄豆黄素及甘草素/异甘草素的分子离子作为特征离子进行扫描，将搜寻到的疑似糖基化类黄酮物质的分子离子作为母离子进行二级质谱扫描，得到谱图与谱库对比确定化学结构再与标准物进行验证。所述方法灵敏准确适用于微量甚至痕量类黄酮物质的分析检测。

主权项

一种液相色谱‑质谱联用对烟草中类黄酮物质进行分离鉴定的方法，其特征在于包括制样、仪器分析及分离鉴定工序，具体包括：A、制样：将采集的烟草植物组织研磨粉碎，冷冻干燥，称取已干燥样本，按0.1ml/mg样本的用量加入提取剂，超声提取，离心，收集上层清液，按0.5ml/ml上层清液的用量加入水，按1ml/ml上层清液的用量加入氯仿进行涡旋混匀，离心，再取上层清液作为色谱分析样本；B、仪器分析：液相色谱分析条件：规格为15cm×2.1mm×1.7μm的Waters BEH C18色谱柱；流动相A为水，流动相B为乙腈，两相均添加0.1%的甲酸和0.2 mmol/L的醋酸铵；流动相梯度洗脱程序如下：0~1min，10%B；1~9min，10%B—90%B；9~11min，90%B—100%B；11~11.1min，100%B—10%B；11.1~13min，10%B；柱温30℃，进样量2 μl，流速0.25 mL/min；质谱分析条件：离子源为电喷雾离子源；在做母离子扫描时正负离子同时扫描，结果相互验证；电喷雾电压±4000 V；帘气压力40 psi；离子源温度700 ℃；辅助气1，60 psi；辅助气2，50 psi；去簇电压‑100 V；C、结构鉴定：游离态类黄酮物质的结构鉴定：以153⁺、151^‑为特征离子进行母离子全扫描，扫描电压30v，扫描范围250~320，搜寻未被糖基取代的游离态类黄酮；对负离子模式下的扫描结果进行离子提取，在正离子模式下在相应的保留时间下也能找到对应的加氢离子，选取这些离子作为母离子进行二级质谱扫描，扫描电压30v，将得到的二级质谱与谱库对比，确定类黄酮物质的化学结构，再与标准化合物进行保留时间和二级质谱验证；糖基化类黄酮物质的结构鉴定：根据游离态类黄酮物质的结构鉴定结果，以这些已鉴定物质的分子离子为特征离子进行母离子扫描，同时将杨梅素、二氢杨梅素、儿茶素/表儿茶素、黄豆苷元、黄豆黄素及甘草素/异甘草素的分子离子也作为特征离子进行母离子扫描，扫描电压30v，扫描范围250~1500；在扫描结果中搜寻可能的糖基化类黄酮物质，选取这些糖基化类黄酮的分子离子作为母离子进行二级质谱扫描，扫描电压30v，将得到的二级质谱与谱库对比，确定类黄酮物质的化学结构，再与标准化合物进行保留时间和二级质谱验证。