药物筛选方法、用于促进胞外基质交联的药物及其应用

摘要

本发明公开一种药物筛选方法、用于促进胞外基质交联的药物及其应用，所述药物筛选方法，用于筛选出对LOXL1基因表达有促进作用的物质，其中，所述药物筛选方法中，包括以下步骤：A、构建由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的二代慢病毒载体；B、用二代慢病毒载体感染人成纤维细胞，构建整合有P_LOXL1-ZsGreen元件的人成纤维细胞；C、药物筛选：将所述整合有P_LOXL1-ZsGreen元件的人成纤维细胞接种于培养基中，将待测物质加入到人成纤维细胞的细胞培养基中；培养；通过检测绿色荧光强度是否增加来判断待测物质对LOXL1基因表达的促进作用。本发明所提供的方法操作简单，具有广泛的适用性。

主权项

一种药物筛选方法，用于筛选出对LOXL1基因表达有促进作用的物质，其特征在于，所述药物筛选方法中，包括以下步骤： A、构建由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的二代慢病毒载体：将人LOXL1基因启动子片段克隆到慢病毒载体pLVX‑IRES‑ZsGreen1上，并将慢病毒载体pLVX‑ZsGreen上原有的CMV启动子置换下来，得到二代慢病毒载体pLenti‑P_LOXL1‑ZsGreen，所述二代慢病毒载体pLenti‑P_LOXL1‑ZsGreen含有由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的元件P_LOXL1‑ZsGreen；B、用二代慢病毒载体感染人成纤维细胞，构建整合有P_LOXL1‑ZsGreen元件的人成纤维细胞；C、药物筛选：将所述整合有P_LOXL1‑ZsGreen元件的人成纤维细胞接种于培养基中，贴壁过夜；将待测物质溶解于DMSO中并加入到人成纤维细胞的细胞培养基中；经过培养后，检测人成纤维细胞的绿色荧光强度，通过检测绿色荧光强度是否增加来判断待测物质对LOXL1基因表达的促进作用；所述人LOXL1基因启动子序列如SEQ ID NO.1所示。