孕酮完全抗原的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种孕酮完全抗原的制备方法及其应用，本发明通过碳二亚胺法(EDC)将活化的11α-羟孕酮(11α-OH-P₄)，与卵清白蛋白(OVA)，选用进行偶联，制备免疫抗原。最后将制备的免疫抗原通过免疫小鼠制备抗血清，并确定检测抗原的最佳包被浓度。

主权项

孕酮完全抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将100mg11α‑OH‑P₄与30mg半琥珀酸酯化物溶于5mL无水吡啶中，在95℃水浴锅中水浴90min后，95℃烘干，转化为黄色结晶109.3mg。S2、在0.5mL DMF中溶解30mg S1所得的11α‑OH‑P₄‑HS；S3、再将8.94mg NHS和16.02mg DCC分别溶于0.01mL DMF中；S4、将上述S2所得溶液加入S3所得溶液中后，室温下振荡90min；S5、取A、B两份7mL PBS溶液，在A溶液中加入95.2mg BSA，在B溶液中加入95.2mg OVA后，分别加入S4所得溶液中，4℃下搅拌过夜；；S6、将S5所得A、B液体分别装入透析袋中，在0.1mol/L NaHCO₃2.2L中透析4.5小时，在2.2L去离子水中透析5小时，三次，最后放入pH＝7.0的PBS溶液，中透析过夜；S7、取出透析袋内液体，低温离心机4℃，10000rpm离心30min，弃去沉淀，取上清液；S8、将S7所得上清液真空冷冻干燥，制备出P₄‑BSA偶联物和P₄‑OVA偶联物。