一种减弱反馈抑制菌株生产谷胱甘肽的方法

摘要

本发明提供了一种谷胱甘肽合成酶系重组质粒及其构建方法和应用、一种谷胱甘肽合成酶系的重组质粒及其构建方法和应用、一种累积谷胱甘肽方法。本发明提供的谷胱甘肽合成酶系重组质粒包括GSH1和GSH2序列和两段合适的载体片段；这种方法的原理在于，GSH1与GSH2连接在启动子不同的载体上，通过在不同时间添加诱导剂实现GSH1与GSH2的分步表达而减少反馈抑制；使用本发明提供的方法可以明显的减弱反馈抑制，提高了谷胱甘肽生产量，提高原料利用率，可为进一步研究生物法合成谷胱甘肽建立一个基础模型。除此之外，该方法及思路可以用于其他因反馈抑制限制产量提高的目的产物，为生产有价值的产品提供了新的思路。

主权项

一种减弱反馈抑制菌株提高谷胱甘肽累积量的生物合成方法，其特征在于：构建两种谷胱甘肽合成酶系共表达重组质粒转化累积谷胱甘肽原始菌株E.coli BL21(DE3)，获得重组菌，通过发酵培养重组菌，并在发酵培养一定时间后，根据两个载体启动子T7启动子和araBAD启动子的不同调控两个大肠杆菌谷胱甘肽合成酶基因GSH1和GSH2的表达时间，用诱导剂乳糖和阿拉伯糖分别诱导谷胱甘肽代谢中的两个关键酶基因GSH1和GSH2的表达，从而使GSH1和GSH2分开表达，进而使合成γ一谷氨酰半胱氨酸和谷胱甘肽分步进行，消除反馈抑制，提高谷胱甘肽的累积量，所述GSH1和GSH2序列分别如NCBI上Gene ID为242378250和253978924的序列所示。