一种用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法

摘要

本发明属于功能高分子薄膜材料领域，涉及一种用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法。该复合薄膜采用层层自组装技术制备而成，首先制备出含有海藻酸钠的多层膜，利用海藻酸钠原位还原制备纳米银基底，随后吸附壳聚糖、聚丙烯酰胺以及检测DNA。利用纳米银基底的表面等离子体效应增强DNA嵌入染料的荧光，实现DNA高灵敏检测。本发明克服了现有固态DNA检测体系制备繁琐，灵敏度低和成本高等缺点，具有制备快捷、灵敏度高、成本低、易于器件化等优点，在基因检测，疾病诊断及药物研发等领域具有很好的应用前景。

主权项

一种用于DNA荧光检测的复合纳米银薄膜的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将固体基片浸于双氧水和浓硫酸体积比为2:5‑1:2的混合溶液中，保持0.5‑1小时取出后，冲洗干燥待用；(2)将步骤(1)干燥后的固体基片浸入1‑2mg/mL带正电的阳离子聚电解质溶液保持15‑30分钟后取出并冲洗干燥；再将其浸入的1‑2mg/mL带负电的海藻酸钠溶液保持15‑30分钟后取出冲洗干燥；重复以上过程制备自组装多层膜；(3)将步骤(2)制备的自组装多层膜浸入预先配制的质量百分比为0.5‑2％的银氨溶液中，升温至60‑80℃温度范围内，保温并搅拌0.5‑1小时，制得纳米银薄膜；(4)将步骤(3)制备的纳米银薄膜浸入1‑2mg/mL的带正电的壳聚糖溶液保持15‑30分钟，取出冲洗干燥；再将其浸入1‑2mg/mL的带负电的聚丙烯酸溶液保持15‑30分钟取出并冲洗干燥；重复以上过程得到壳聚糖/聚丙烯酰胺/壳聚糖/聚丙烯酰胺/壳聚糖/聚丙烯酰胺/壳聚糖中间层结构；(5)将扩增前后的DNA与吖啶类染料分别混合，涂覆于步骤(4)所制备的复合纳米银薄膜表面，保持2‑5小时后冲洗干燥；(6)采用荧光光谱仪测定不同薄膜上吖啶类染料的荧光强度，荧光强度高的为扩增后的DNA,荧光强度低的为未扩增的DNA。