冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法

摘要

本发明涉及一种冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法。本发明方法以抗MTG兔多抗为包被抗体，抗MTG鼠单抗为检测抗体，再结合HRP标记的抗IgG1二抗，构成双抗体夹心ELISA检测方法，对冷冻鱼糜中是否添加MTG进行定量检测。本发明方法检测限为20ng/mL，该检测方法在0.6mg/mL～10mg/mL范围内OD₄₅₀值与MTG浓度的log值呈线性关系，冷冻鱼糜样品添加回收率为94％以上，板内变异系数为1.12％～4.02％，板间变异系数为5.43％～6.87％。本发明方法灵敏度高，样品前处理简便，适用于冷冻鱼糜中MTG的定量检测，防止冷冻鱼糜原料掺假。

主权项

一种冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：①包被：抗MTG兔多抗用包被缓冲液进行稀释至1‑3ug/mL，以每孔100uL的量加入酶标板进行包被，4℃冰箱反应12h；②洗涤：将酶标板甩干，每孔加入200uL洗涤液，振荡3min，甩干液体并拍干酶标板，重复洗涤3次；③封闭：每孔100uL封闭液，37℃烘箱反应1h，反应结束后重复上述洗涤步骤；④加抗原：抗原样品与样品稀释液在乳化机作用下匀浆3min，得到的浆液磁力搅拌12h，之后再6000rpm离心15min，取上清液再次离心(6000rpm 15min)，离心得到的上清液即为待测样品；每孔加入100uL待测样品，37℃烘箱反应1h，反应结束后重复上述洗涤步骤；⑤加检测抗体：抗MTG鼠单抗用抗体稀释液进行稀释，每孔加入100uL，37℃烘箱反应1h，反应结束后重复上述洗涤步骤；⑥加酶标二抗：酶标二抗用抗体稀释液进行稀释，每孔加入100uL，37℃烘箱反应1h，反应结束后重复上述洗涤步骤；⑦加显色液：将显色A液、显色B液、30％H₂O₂以200:5000:1的比例混合，每孔加入100uL，37℃烘箱反应15min；⑧加终止液：每孔加入100uL终止液，用酶标仪测定OD₄₅₀值；⑨按①‑⑧的检测方法进行操作，绘制双抗体夹心ELISA法MTG浓度测定曲线，以抗原浓度的log值为横坐标，各孔的OD₄₅₀值为纵坐标；⑩掺假冷冻鱼糜按0.6mg/mL～10mg/mL进行稀释处理，然后按照①‑⑧的检测方法进行操作，通过标准曲线计算测定浓度。