一种提高丝裂霉素C产率的制备方法

摘要

本发明提供了一种提高丝裂霉素C产率的制备方法，该方法向丝裂霉素C的发酵培养基中添加含瓜氨酸和精氨酸复合前体，以及HP-21树脂，制备出专用发酵培养基，将产生丝裂霉素C的头状链霉菌依次通过斜面培养基、种子培养基培养后，再转接于制备的专用发酵培养基培养。由于瓜氨酸和精氨酸复合前体的作用使得发酵产生的有效复合物中丝裂霉素C含量大幅度提高至30-45％，从而可以大幅降低丝裂霉素C的生产成本，因此该制备丝裂霉素C的方法具有良好的工业化前景。

主权项

一种提高丝裂霉素C产率的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)制备专用发酵培养基：向丝裂霉素C的发酵培养基中添加含瓜氨酸和精氨酸复合前体，以及HZ‑21大孔吸附树脂，每升发酵培养基添加0.02‑0.06升复合前体溶液，每升发酵培养基添加2—5克HZ‑21大孔吸附树脂，用质量百分比浓度不超过10％的碱溶液将pH值调至7.1‑7.2，复合前体溶液的配制方法：每升纯化水中加瓜氨酸10—15克、精氨酸5—7.5克，且所加瓜氨酸与精氨酸的质量比为2:1，均质后至少静置20小时后使用，所述丝裂霉素C的发酵培养基的组成为葡萄糖1％、淀粉3％、豆饼粉2.0％、玉米浆0.5％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.01％、玉米油0.2％、其余为水，pH调为7.00，百分比均为质量百分比；(2)将产生丝裂霉素C的头状链霉菌ATCC27422接种于斜面培养基上进行培养，在28±2℃培养6‑8天，然后接种于种子培养基培养，在28±2℃培养30‑48小时，再转接于步骤(1)制备的发酵培养基于28±2℃培养168‑192小时，当代谢产物中丝裂霉素C含量最高时放罐，从中回收HP‑21大孔吸附树脂，所述斜面培养基组成为淀粉1.0％、碳酸钙0.1％、硝酸钾0.1％、硫酸镁0.05％、氯化钠0.05％、磷酸二氢钾0.03％、天冬酰胺0.002％、麸皮2.0％、琼脂2.0％、其余为水，pH自然；所述种子培养基组成为葡萄糖1％、淀粉3％、豆饼粉2.0％、玉米浆0.5％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.01％、玉米油0.2％、其余为水，pH调为7.00，百分比均为质量百分比；(3)然后向回收过HZ‑21大孔吸附树脂后的发酵培养液中先加入质量为发酵培养液质量0.01％—0.05％的十二烷基磺酸钠，再加入质量为为发酵培养液质量0.01％—0.02％的硫酸锌，用质量百分比浓度不超过10％的碱溶液将pH值调至8.0‑10.0后过滤，滤液再上HZ‑21大孔吸附树脂柱动态吸附；(4)合并回收的HZ‑21大孔吸附树脂和动态吸附后的HZ‑21大孔吸附树脂柱中的树脂，并对合并后的所有树脂进行提取和精制即得到丝裂霉素C产品。