霍乱弧菌(VC)的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种霍乱弧菌(VC)的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒。包括：捕获探针、VC检测引物T7引物和nT7引物、VC检测探针、M-MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶等试剂。本发明试剂盒能够检测食品中的VC RNA，具有特异性高、灵敏度高(可达100 CFU/ml)、污染低(扩增产物RNA在自然环境下易于降解)及快速检测(常规50分钟完成检测)的特点，将在霍乱弧菌快速检测中发挥重要作用，应用前景广阔。

主权项

一种霍乱弧菌(VC)的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，包含有一条序列表中序列1所示的霍乱弧菌VC的靶标核酸即VC RNA的捕获探针，一对用于在M‑MLV反转录酶作用下产生VC靶标核酸VC RNA的DNA拷贝的VC检测引物T7和nT7，一条用于与在T7RNA聚合酶作用下根据所述VC靶标核酸VC RNA的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异结合的VC检测探针，一条用于与VC核苷酸序列互为竞争、与捕获探针特异性结合并使用同一对引物即T7和nT7的VC内标核苷酸即VC IC RNA，和一条与VC内标核苷酸的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异性结合的VC内标检测探针；所述捕获探针的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述VC检测引物由T7引物和nT7引物组成，T7引物序列如序列表中序列3所示，nT7引物序列如序列表中序列4所示；所述VC检测探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示，5’端标记FAM荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团；所述VC内标检测探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，5’端标记HEX荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团。