微生物来源的炎症因子受体拮抗剂及其制备方法

摘要

本发明涉及微生物来源的炎症因子受体拮抗剂及其制备方法，其中所述炎症因子受体拮抗活性剂为一种肿瘤坏死因子受体(TNFR)拮抗剂A，其包括A1和A2两种形式。本发明还涉及一种产生所述肿瘤坏死因子受体拮抗剂A的球孢白僵菌A1。本发明还涉及所述肿瘤坏死因子受体(TNFR)拮抗剂A用于制备治疗与天然肿瘤坏死因子受体配基过量相关疾病的药物的用途。

主权项

微生物来源的肿瘤坏死因子受体拮抗剂A1或A2，其采用如下方法制备：1)粗品制备：将经过滤的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)A1发酵液通过GDX‑104型大孔吸附树脂，弃去流出液，用30％丙酮洗脱，收集洗脱液并挥干，得深棕色粗品；2)受体拮抗剂的纯化：对于步骤1)中的粗品用甲醇溶解并充分离心后所得到的沉淀，经去离子水溶解后，上DEAE‑Sephadex A25柱，依次用H2O、0.5NNH4Cl、0.1N HCl梯度洗脱，收集0.1N HCl的洗脱液，用NaOH中和至中性，上GDX‑104型大孔吸附树脂柱，用去离子水洗脱至检测不到Cl^‑离子，接着用30％丙酮洗脱，收集洗脱液，挥去丙酮后冷干，得白色絮状固体，即肿瘤坏死因子受体拮抗剂A1；对于步骤1)中的粗品用甲醇溶解并充分离心后所得到的上清液，将上清液浓缩后进行ODS/C‑18反相柱色谱，以水‑甲醇系统自100％水至100％甲醇不连续梯度洗脱，流速3ml/15min，每份3ml，共得90份，组分20‑25冷干得白色粉末，即肿瘤坏死因子受体拮抗剂A2，其中所述球孢白僵菌A1的发酵液通过如下方法制备：以YM斜面培养基28℃培养7天的球孢白僵菌A1作为菌种，接种于100ml种子培养基中，26℃振荡培养48小时，然后转种至发酵培养基中，接种量为2％，26℃振荡培养96小时得到所述球孢白僵菌A1的发酵液，所述的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)A1的保藏号为CGMCC No.4294。