用于糖尿病治疗和β细胞成像的蛋白药物

摘要

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是营养素依赖的反应中分泌的肠降血糖素激素大家族的成员。GLP-1作用于胰β细胞上高表达的GLP-1受体(GLP-1R)。该肽具有发展糖尿病治疗和诊断的巨大潜力。然而，由于被二肽基肽酶-1(DPP-4)降解，该肽的药物作用受体内不稳定性和短寿命的影响。已将30个氨基酸的肽GLP-1整合到稳定的宿主蛋白人钙结合蛋白D9k中。如通过GLP-1R表达细胞的免疫染色分析表明的，融合蛋白与GLP-1R结合。该融合蛋白药物可用于糖尿病治疗和GLP-1R受体靶向MR成像。融合蛋白具有约14kDa的大小，这能够实现有效的组织穿透和滞留，和延长的循环时间，融合蛋白是稳定的，在与75％人血清孵育48小时之后维持完整并保持活性。煮沸10分钟后该蛋白保持其天然折叠结构，这形成大规模生产该融合蛋白(＞30mg/l细菌培养物)的实验方法的基础。在小鼠试验中尚未观察到毒性。因此，本公开内容的一个方面提供了包括其特征是与靶细胞的位点选择性结合并与第二肽连接的第一肽的融合蛋白，其中融合蛋白比单独的所述第一肽更稳定。在本公开内容的该方面的实施方式中，融合蛋白还可包括与其连接的可检测标记。在本公开内容的该方面的某些实施方式中，融合蛋白的第一肽可以是胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)(7-36)或胰高血糖素样肽-1(GLP-1)(9-36)或其保守变体。

主权项

一种融合蛋白，由第一肽和第二肽组成，所述第一肽连接至所述第二肽的羧基末端，其中所述第一肽是氨基酸序列为HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG的胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)、氨基酸序列为HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR的胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)(7‑36)或氨基酸序列为EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR的胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)(9‑36)并且所述第二肽为钙结合蛋白D9k的区域，且其中所述第二肽的氨基酸序列选自由以下组成的组：MSTKKSPEELKRIFEKYAAKEGDPDQLSKDELKLLIQAEFPSLLKGPNTLDDLFQELDKNG(SEQ ID NO.:2)，MSTKKSPEELKRIFEKYAAKEGDPDQLSKDELKLLIQAEFPCLLKGPNTLDDLFQELDKNG(SEQ ID NO.:3)，MSTKKSPCELKRIFEKYAAKEGDPDQLSKDELKLLIQAEFPSLLKGPNTLDDLFQELDKNG(SEQ ID NO.:4)，和MSTKKSPEELKRIFEKYAAKEGDPDDLSKDELKLLIQAEFPCLLKGPNTLDDLFQELDKNG(SEQ ID NO.:17)，其中所述融合蛋白比单独的所述第一肽更稳定。