中华鳖胚胎细胞组织块的原代培养方法

摘要

本发明公开了一种中华鳖胚胎细胞组织块的原代培养方法。本发明步骤为：（1）采集中华鳖的受精蛋，消毒；（2）破开受精蛋的蛋壳，将胚胎从蛋黄中剥离出来，将剥离出来的胚胎组织放在1×PBS缓冲液中清洗，然后浸泡灭菌；（3）将胚胎组织放入M199培养基中清洗4-5次，然后转移至完全培养基中并将胚胎组织剪碎得组织块，再将组织块用完全培养基清洗一次；（4）用无菌的一次性接种针均匀分散组织块于细胞瓶的内壁上，使组织块贴壁生长3-4小时，然后加入完全培养基浸没组织块，30-31℃恒温培养3天以上。本发明操作简单，培养方便，无需特定的细胞分离液，培养成功率高。

主权项

一种中华鳖胚胎细胞组织块的原代培养方法，其特征在于：所述原代培养方法包括以下步骤：（1）采集中华鳖的受精蛋，受精蛋表面用质量浓度70‑75%酒精喷洒消毒；（2）破开受精蛋的蛋壳，将胚胎从蛋黄中剥离出来，将剥离出来的胚胎组织放在1×PBS缓冲液中清洗，然后在质量浓度70‑75%酒精中第一次浸泡灭菌，接着在另一质量浓度70‑75%酒精中第二次浸泡灭菌；（3）将胚胎组织放入M199培养基中清洗4‑5次，然后转移至完全培养基中并将胚胎组织剪碎得组织块，再将组织块用完全培养基清洗一次；（4）用无菌的一次性接种针均匀分散组织块于细胞瓶的内壁上，使组织块贴壁生长3‑4小时，然后加入完全培养基浸没组织块，30‑31℃恒温培养3天以上。