鉴别I群禽腺病毒感染的ELISA检测方法

摘要

本发明公开了一种鉴别I群禽腺病毒感染的ELISA检测方法，是以FAVI100K重组蛋白为包被抗原，鸡血清为检测样品，辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG为酶标二抗来检测I群禽腺病毒感染产生的抗体。本发明特异性强，操作简单，耗时短，成本低，可大批量检测，能有效的排除I群禽腺病毒灭活疫苗免疫的干扰，特异性的检测I群禽腺病毒感染，从而能区分FAVI感染动物与接种FAVI灭活疫苗动物，为我国消灭FAVI提供一种有实际价值的诊断工具。

主权项

一种鉴别I群禽腺病毒感染的ELISA检测方法，其特征在于：以FAVI100K重组蛋白为包被抗原，鸡血清为检测样品，辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG为酶标二抗来检测I群禽腺病毒感染产生的抗体；所述包被抗原是经如下步骤制备：(1)FAVI100K重组蛋白的原核表达：以FAVI CELO毒株的DNA为模板，扩增100K基因前段核苷酸序列GenBank:U46933:23671‑24732nt，克隆至pGEX‑4T‑1原核表达载体中，在大肠杆菌DH5α中表达，100K基因部分序列扩增的引物如下：上游引物：5’‑CCGGAATTCTCATCGAAAATGGCAGACAAGAT‑3’，插入EcoR I酶切位点；下游引物：5’‑ATTTGCGGCCGCCCCGAGACGCCATTTAGGTA‑3’，插入Not I酶切位点；(2)对FAVI100K重组蛋白反应原性的鉴定；(3)将鉴定后的FAVI100K重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖树脂吸附、洗涤、洗脱的亲和层析方法，获得纯化的100K‑pGEX重组蛋白，即包被抗原。