水仙迟季黄化病毒检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种水仙迟季黄化病毒检测试剂盒及其检测方法，专用于水仙迟季黄化病毒的检测。该试剂盒包括：外侧上游引物、外侧下游引物、内侧上游引物、内侧下游引物、RTBuffer、RNA酶抑制因子、反转录酶、dNTPs、PCR Buffer、Mgcl₂、Taq DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照和RNase-free ddH₂O。本发明根据水仙迟季黄化病毒基因序列设计特异性引物，利用巢式RT-PCR技术对水仙迟季黄化病毒进行检测。首先以提取的RNA为模板反转录合成cDNA，利用cDNA为模板进行第一轮PCR扩增，再以第一轮PCR产物为模板进行第二轮PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，如果出现大小为539bp的特异性目的片段，则判定检测的病毒为水仙迟季黄化病毒。本发明具有特异性强、灵敏度高、准确性好、检测时间短的显著优点，适用于进出境口岸及农业生产上水仙迟季黄化病毒的快速检测和监测。

主权项

一种水仙迟季黄化病毒检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：1）外侧上游引物：10μmol/L，引物序列为5’‑CCACTTGAAGTCTATCACCA‑3’；2）外侧下游引物：10μmol/L，引物序列为5’‑CCAAACTAGCATCCTTGTGT‑3’；3）内侧上游引物：10μmol/L，引物序列为5’‑ATCACATACACACCACGACA‑3’；4）内侧下游引物：10μmol/L，引物序列为5’‑GTGTGTCTCTCCGTGTTCTC‑3’；5）RT Buffer：5×；6）RNA酶抑制因子：40U/μL；7）反转录酶：200U/μL；8）dNTPs：10mmol/L；9）PCR Buffer：10×；10）Mgcl₂：25mmol/L；11）Taq DNA聚合酶：5U/μL；12）水仙迟季黄化病毒的阳性对照样品；13）不含水仙迟季黄化病毒的阴性对照样品；14）RNase‑freeddH₂O。