鸭瘟病毒转移载体pUC-ΔgC-EGFP及gC缺失重组株DPV-ΔgC-EGFP

摘要

本发明公开了一种鸭瘟病毒转移载体pUC-ΔgC-EGFP及鸭瘟病毒gC缺失重组株DPV-ΔgC-EGFP，含所述转移载体pUC-ΔgC-EGFP的大肠杆菌种(Escherichia coli)DH5α于2011年11月30日保藏于位于武汉大学的典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M2011432。该转移载体可通过与鸭瘟病毒同源重组，挑斑纯化后获得EGFP标记的重组病毒DPV-ΔgC-EGFP。实验结果表明，三种剂量重组病毒DPV-ΔgC-EGFP和弱毒疫苗一样能够给强毒攻击后的雏鸭提供100％保护，揭示其有望发展成为一种有效预防鸭瘟病的新型疫苗。

主权项

鸭瘟病毒转移载体pUC‑ΔgC‑EGFP的制备方法，其特征在于由以下步骤完成：1)用Xho I和BamH I双酶切pEGFP‑C1，末端补平后，平末端连结，再通过PCR方法扩增出包含CMV启动子、EGFP和SV40polyA的片段共1315bp片段，克隆进载体pMD19‑T，构建pMD‑EGFP，其中含CMV启动子和SV40polyA的EGFP表达盒；2)以鸭瘟病毒CHv株为材料，通过PCR方法将UL44基因的左端1178bp片段和右侧1421bp片段扩增出来，克隆进载体pMD19‑T，构建质粒pMD‑gCL和pMD‑gCR，分别包含UL44基因的左侧1178bp片段和右侧1421bp片段；3)先将pMD‑gCL用Hind III和XbaI酶切，回收1178bp片段，克隆进已用相应酶酶切的pUC19载体，然后再将pMD‑gCR中的UL44右侧片段以BamH I和EcoR I插入到已含有UL44左侧片段的pUC‑gCL载体中，获得载体pUC‑ΔgC，在该载体的Xba I和BamH I之间连接含CMV启动子和SV40polyA的EGFP表达盒，获得含有报告基因的转移载体pUC‑ΔgC‑EGFP；上述扩增UL44基因的左侧1178bp片段的上、下游引物分别是：gCLF：5′‑TTGCCCAAGCTTGGGACAAGAACGGAGGTCAAGAC‑3′gCLR：5′‑CTAGCTCTAGAGCGATATAGAATCGTTAAGTATT‑3′上述扩增UL44基因的右侧1421bp片段的上、下游引物分别是：gCRF：5′‑ATACGGGATCCCGTGGCCGTTTGTTTCTATTAT‑3′gCRR：5′‑ATCGGAATTCCATACACGGATTAGCCAGA‑3′上述扩增EGFP1315bp片段的上、下游引物分别是：GFPF：5′‑TACCGGGATCCCGTAGTTATTAATAGTAATCAATIACG‑3′GFPR：5′‑AACGCTCTAGAGCATGCAGTGAAAAAAATGCT‑3′。