一种透性化与超声联用的功能微生物转化方法

摘要

本发明公开了一种透性化与超声联用的功能微生物转化方法，采用Decon溶液对微生物细胞进行透性化处理，降低细胞壁和细胞质膜的磷脂含量；在透性化处理的同时，通过向体系添加钙离子，帮助外源DNA沉降和输运；然后施加低频超声波20-80kHz，将欲转化的脱氧核糖核酸和核糖核酸输运至细胞内；采用Decon透性化处理后，超声转化时超声的功率可以相应降低、超声时间缩短，降低了超声对细胞的损伤；通过合理的选择透性转化试剂及确定相应浓度，得到一种同时满足透性化处理与超声转化技术的介质溶液；能够实现对更大范围的宿主菌进行外源核酸分子转化并且提高转化效率，从而为遗传工程改造和新的功能微生物培育提供有效的技术手段，提高效率并降低成本和操作难度。

主权项

一种透性化与超声联用的功能微生物转化方法，其特征在于：包括如下步骤： 1)在液体培养基中培养微生物，使其进入对数生长期，得到菌液； 2)对菌液离心，并以透性转化试剂重悬，控制透性转化试剂的用量，使细胞浓度在此过程中浓缩5‑20倍，进行细胞透性化处理； 3)将经透性化处理的微生物离心后重悬于透性转化试剂，并置于转化用的玻璃瓶； 4)在玻璃瓶中加入欲转化的外源核酸分子后，将玻璃瓶置于超声波仪器中，施加频率为20‑80kHz的超声，超声采用连续或间歇式； 5)微生物复苏，在选择性培养基上进行转化体筛选；步骤2)中加入的透性转化试剂为MDF500Decon溶液、氯化钙与磷酸缓冲溶液的混合液，MDF500Decon溶液的体积百分比浓度为0.5％‑4％；氯化钙最终浓度为10‑100m mol/L；步骤1)所述的微生物为脱硫弧菌Desulfovibrio vulgaris或恶臭假单胞菌Pseudomonas putida；步骤2)所述的透性化处理的时间为10‑40min。