一种猪瘟病毒检测方法

摘要

本发明涉及一种猪瘟病毒检测方法,属于分子生物学领域。本发明该方法通过设计的可检测猪瘟病毒的通用引物，并将PT-PCR技术与核酸胶体金免疫层析技术相结合，建立的适用于猪瘟病毒的快速检测方法。本发明设计和优化了一种检测猪瘟病毒的通用引物，并与核酸胶体金层析试纸条技术联用在短时间内即可完成不同种锦紫苏类病毒的PCR产物的检测，不需要电泳和溴化乙锭的染色，更为快速实用，简单，灵敏，且安全无污染。

主权项

一种猪瘟病毒检测方法，主要包括以下步骤：将患病仔猪组织病料充分研磨制成悬浮溶液，反复冻溶3次，离心取上清，按现有市场上的RNA提取试剂盒说明书要求，抽提RNA作为模板进行RT‑PCR扩增待检测液；取一定量待检测液，加入10×One step RNA PCR buffer，MgCl₂，DNTP Mixture，RNase Inhibitor，AMV‑Optimized Taq，AMV RTase，正向引物，反向引物,用灭菌DEPC水补足，所述正向引物，反向引物分别标记了地高辛、荧光素；采用常规方法制备胶体金溶液、胶体金‑兔抗地高辛多克隆抗体结合物、层析试纸条，在检测点加入荧光素单克隆抗体，在质控点加入羊抗兔多克隆抗体；将步骤（2）中所得PCR产物与胶体金‑兔抗地高辛多克隆抗体结合物混合后插入试纸条，如果检测点和质控点均显色则为锦紫苏类病毒阳性结果，仅质控点显色则为阴性结果。