果汁中脂环酸芽孢杆菌的免疫磁分离-ELISA检测方法

摘要

本发明公开了果汁中脂环酸芽孢杆菌的免疫磁分离-ELISA检测方法，方法包括：利用脂环酸芽孢杆菌免疫磁微球对果汁样品中的脂环酸芽孢杆菌进行分离富集得到待检测富集样品；利用ELISA检测方法检测待检测富集样品中是否存在脂环酸芽孢杆菌；所用的脂环酸芽孢杆菌的免疫磁性微球是用胺基化磁性微球包被氧化脂环酸芽孢杆菌特异性抗体而得到的。本发明通过抗原-抗体的特异性识别，将脂环酸芽孢杆菌吸附到免疫磁性微球表面，在磁场的作用下分离富集获得脂环酸芽孢杆菌样品，通过ELISA检测体系，对目标菌体进行识别。相对于现有的ELISA检测方法，该方法具有检测限低、时效性和准确性更可靠的特点。

主权项

果汁中脂环酸芽孢杆菌的免疫磁分离‑ELISA检测方法，其特征在于，方法包括：将脂环酸芽孢杆菌免疫磁性微球加入果汁样品中对脂环酸芽孢杆菌进行吸附分离，所述果汁样品的可溶性固形物含量小于等于15°Brix；将吸附有脂环酸芽孢杆菌的脂环酸芽孢杆菌免疫磁性微球用浓度为0.1mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液悬浮得待检测富集样品，且每5mg脂环酸芽孢杆菌免疫磁性微球的PBS缓冲液用量为100‑250μL；利用ELISA检测方法检测待检测富集样品中是否存在脂环酸芽孢杆菌；所述的脂环酸芽孢杆菌免疫磁性微球是用胺基化磁性微球包被氧化脂环酸芽孢杆菌特异性抗体而得到的；所述的胺基化磁性微球的制备方法包括：(1)80‑90℃条件下，Fe₃O₄磁核在硅酸钠溶液中进行硅烷化反应制备硅烷化磁性微球；所述硅酸钠溶液的质量浓度为4％‑5％、PH大于11；所述的Fe₃O₄磁核的粒径为15‑25nm、磁性的饱和磁化强度为(40‑80emu)/g；(2)调节硅烷化磁性微球的PH呈中性；(3)80‑90℃条件下，将PH呈中性的硅烷化磁性微球、甲醇、3‑氨丙基三乙氧基硅烷、去离子水和甘油混合反应制备胺基化磁性微球；所述硅烷化磁性微球、甲醇、3‑氨丙基三乙氧基硅烷、去离子水和甘油的用量为：所述氧化脂环酸芽孢杆菌特异性抗体的制备方法包括：利用含高碘酸钠的PBS缓冲液对脂环酸芽孢杆菌特异性抗体进行氧化处理，之后采用Sephadex G‑25层析柱收集获得氧化脂环酸芽孢杆菌特异性抗体；所述含高碘酸钠的PBS缓冲液中高碘酸钠浓度为10mg/mL，PBS缓冲液的浓度为0.1mol/L、pH值为7.4；所述脂环酸芽孢杆菌特异性抗体的浓度为(1‑3mg)/mL；所述含高碘酸钠的PBS缓冲液与脂环酸芽孢杆菌特异性抗体的体积比为(1‑3)：1；所述的氧化脂环酸芽孢杆菌特异性抗体的浓度为(1‑2mg)/毫升，且每毫升氧化脂环酸芽孢杆菌特异性抗体用20mg的胺基化磁性微球包被；利用封闭液封闭所述的脂环酸芽孢杆菌的免疫磁性微球，所述封闭液的组分量为：每100ml浓度为0.01mol/L的PBS缓冲液中含有1‑10克BSA和0.05ml Tween‑20。