一种TBX5蛋白的表达方法

摘要

本发明公开了一种TBX5蛋白的表达方法。包括如下步骤：（1）诱导表达：基于原核系统诱导表达，裂解菌体；（2）分离纯化：利用镍柱亲和层析来分离纯化所得菌体裂解上清中的TBX5蛋白。本发明采用高浓度的蛋白诱导表达方法，提高了细菌中目的蛋白的产量，裂解菌体过程中没有进行包涵体的变性和复性，而是直接从超声裂解的上清中纯化蛋白，使得目的蛋白的回收率和活性得到了最大程度的保持，而且通过优化洗脱方案使得目的蛋白的获取量较之现有方法也有了较大的提高。

主权项

一种TBX5蛋白的表达方法，其特征在于包括如下步骤：（1）诱导表达：基于原核系统诱导表达，裂解菌体；（2）分离纯化：利用镍柱亲和层析来分离纯化所得菌体裂解上清中的TBX5蛋白；所述的原核系统诱导表达是重组表达质粒转化感受态细菌后，加入LB培养液，37℃振荡培养过夜，然后按2:1或者3:1体积比，转换到minimal M9中并加入0.5mM IPTG，诱导表达；所述的分离纯化是：预装镍亲和层析柱，采用5倍柱体积蒸馏水洗柱，然后用5倍柱体积的结合缓冲液平衡柱，将离心得到的菌体上清过柱，收集流出液，然后用含10mM咪唑的洗涤缓冲液进行洗涤；最后用洗脱液进行洗脱，收集目的蛋白；所述洗脱液的配方按质量百分数计算，含有10%甘油，2%SDS，余量为水。