发明名称 |
一种烟草真空渗透直接遗传转化的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种烟草真空渗透直接遗传转化的方法,本方法将预培养后的烟草幼叶外植体浸入携带目的基因的pAHC25质粒DNA溶液中,进行真空渗透处理后,将叶外植体培养在含草丁膦的筛选培养基上,诱导外植体上形成的抗草丁膦抗性的愈伤组织分化不定芽,不定芽继续生长形成试管苗,利用PCR扩增方法鉴定携带目的基因的转基因植株。采用本发明提供的技术方案,可将目的基因直接导入烟草细胞,与农杆菌介导的遗传转化相比,减少了抑制农杆菌生长的措施;与聚乙二醇等化学方法的遗传转化相比,减少了从原生质体分离和培养的环节;与基因枪等物理方法的遗传转化相比,不需要昂贵的仪器设备,且操作技术简单。 |
申请公布号 |
CN102618574B |
申请公布日期 |
2014.09.10 |
申请号 |
CN201210113686.6 |
申请日期 |
2012.04.18 |
申请人 |
北京师范大学 |
发明人 |
肖尊安;张彦;潘芳;何艳;李朝霞;郑利文;商庆凯 |
分类号 |
C12N15/82(2006.01)I;A01H5/00(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/82(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种烟草真空渗透直接遗传转化的方法,其特征在于,从高20cm左右的盆栽苗上剪取幼叶,表面消毒后,剪成大小为0.3~0.5cm<sup>2</sup>的叶块,接种到MS培养基上,在温度26±1℃、光照强度4000lx、光周期为16小时光照和8小时黑暗的条件下培养3~8天后,用解剖刀切取叶块边缘长3~5mm、宽1mm左右的叶外植体,将这种幼叶外植体浸入浓度为0.5~1.5μg/μl的pAHC25质粒DNA溶液中,在压强为80kPa~20kPa的条件下持续保持6~15分钟,然后在大气压状态下保持30秒,重复相同的真空渗透处理2~5次。 |
地址 |
100875 北京市海淀区新街口外大街19号 |