一种厌氧真菌乙酰酯酶活性的快速检测方法

摘要

本发明公开了一种厌氧真菌乙酰酯酶活性的快速检测方法，将待测液在离心后，取上清液测定乙酰酯酶活性，将适当稀释的上清液、p-硝基苯乙酯和甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液置于50℃预热，然后向适当稀释的上清液中加入甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液和p-硝基苯乙酯溶液于干燥洁净的96孔酶标板上，50℃反应，用全自动酶标仪检测吸光值，根据p-硝基苯的标准曲线计算乙酰酯酶活性。该方法测定乙酰酯酶活性的方法是在活性最优条件下测得，所以减少了乙酰酯酶活性测定的误差。同时能够优化厌氧真菌乙酰酯酶的活性培养条件，使得厌氧真菌分泌的乙酰酯酶活性最高，一个反应可快速且准确的测定96个检测液的乙酰酯酶活性，且较少的样品量即可检测。

主权项

一种厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测液在1000×g离心10min，取上清液测定乙酰酯酶活性，将适当稀释的上清液、2mM p‑硝基苯乙酯和50mM甘氨酸‑氢氧化钠缓冲溶液置于50℃预热15‑30min，然后向50μL适当稀释的上清液中加入100μL甘氨酸‑氢氧化钠缓冲溶液和50μL p‑硝基苯乙酯溶液于干燥洁净的96孔酶标板上，50℃反应15‑30min后，用全自动酶标仪在410‑420nm下检测吸光值，根据p‑硝基苯的标准曲线计算乙酰酯酶活性。