一种鉴别半夏品种资源的方法

摘要

本发明公开了一种鉴别半夏品种资源的方法，包括基因组DNA提取、PCR扩增18SrDNA序列和序列测定与分析的步骤，其中半夏基因组DNA的提取采用将一定量待测半夏样品的新鲜叶片组织放入离心管中，再加入温水预热后的适当体积配比的SDS与CTAB混合抽提液，混摇5min，用移液枪的枪头伸入上述离心管底部，缓慢顺时针旋转挑取丝状粘稠物质，获得基因组DNA，然后采用植物18SPCR引物18SF和18SR进行18SrDNA序列PCR扩增，随后测序，在NCBI的GenBank数据库中比对分析，从而判断其进化关系与种属来源。本发明的方法快速有效、简单便捷、可操作性强，能够准确鉴定半夏种属来源，确定道地半夏药材资源，为保护半夏种质多样性奠定理论基础，具有较大的应用价值。

主权项

一种鉴别半夏品种资源的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）半夏基因组DNA的提取：选取一定量的待测半夏样品的新鲜叶片组织，放入离心管中；按每克叶片组织2000μL的比例加入温水预热后的适当体积配比的SDS与CTAB混合抽提液，混摇5min；用移液枪的枪头伸入上述离心管底部，缓慢顺时针旋转挑取丝状粘稠物质，获得基因组DNA，将其溶于水中；取溶解后溶液适量，进行1%‑2%琼脂糖电泳检测；（2）18SrDNA序列PCR扩增：将上述所得DNA溶液稀释50‑100倍；准备植物18S PCR引物18SF和18SR；如下建立PCR扩增体系共50‑100μL：水20‑500μL，缓冲液1‑5μL，18SF引物1‑5μL，18SR引物1‑5μL，上述稀释后的DNA溶液作为模板1‑5μL，dNTP 1‑5μL，MgCl2 1‑5μL，rTaq酶 1‑5μL；将上述体系中的材料依次加入PCR管中，放入PCR仪中，设置PCR反应条件，开始反应，反应结束后，得到所需的18SrDNA序列；（3）序列测定与分析：将上述所得的序列进行测序，得到序列信息；在NCBI的GenBank数据库中下载用于比对和进化树分析的天南星科半夏属植物的18SrDNA序列，运用分子信息分析软件对所得半夏样品18SrDNA序列和网上报道的序列进行比对分析，从而判断其进化关系与种属来源。